[发明专利]一种丹参组培苗高效繁育方法

说明书

本发明公开了一种用于丹参组培苗高效繁育的培养基及丹参组培苗高效繁育方法。本发明提高了川丹参组培苗培育过程中的愈伤组织诱导率、优化的培养基组成提高了不定芽及根系再生频率以及川丹参繁殖系数，减少了组培育苗时间，大大满足了川丹参高效繁殖的需求。发明的方法具有极大的推广潜力。

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种丹参组培苗高效繁育方法。

背景技术

丹参为唇形科鼠尾草属动物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，是有名活血化瘀药，主治瘀血所致的各种痛苦悲伤、徵瘕积累、疮疡痈肿以及心悸失眠等证,早泄治疗费用，我国利用丹参已有近2000年的悠长历史。据统计，以丹参为原料的中成药已有一百余种。药理和临床研究表明，丹参对血汗管体系、血液系统、消化系统等方面作用十分明显。

目前，国内丹参组培繁育主要以自然生长叶片等外植体直接诱导愈伤再分化出芽来建立间接再生体系，其外植体褐化、死亡率高、愈伤组织诱导率和增殖系数低；同时组培繁育多采用无菌固体培养基进行再生苗根系诱导，根系诱导时间长，根系诱导后仍需炼苗、移栽，生产成本高，移栽成活率低，影响组培苗的大规模繁殖推广。

因此，如何解决川丹参组培过程中的外植体褐化、死亡问题，并提高川丹参愈伤组织、不定芽及根系诱导率，提高移栽成活率，是优化川丹参高效繁殖的关键，对川丹参工厂化生产繁育具有重要意义。

专利CN107094630A公开了一种丹参组织培养方法，其通过单一激素获得了丹参愈伤组织100％的芽分化率，且使再生从芽长势旺盛，但实现丹参组培苗高效繁育，使之能工厂化生产，除愈伤组织芽分化率外，单个愈伤芽诱导数，生根率，移栽存活率也是关键的因素，可见，其并不适合实际生产应用；CN110178728A公开了一种丹参组培快繁的方法，其将川丹根用于组织培养，虽然获得了100％的生根率，但其需要经过多菌灵、乙醇和升汞的多次消毒，并先后经历芽诱导，壮苗共约55天的培养，形成的组培苗后续还要进行繁琐炼苗，才能移栽，生产成本高，也不适用于川丹参工厂化生产繁育。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种用于丹参组培苗高效繁育的培养基，它包括愈伤组织诱导培养基、芽再生诱导培养基和根系诱导水培营养液；

所述愈伤组织诱导培养基的成分包括：MS培养基，添加有终浓度为2～4mg/L植物生长调节剂，8～10g/L琼脂和20～40g/L蔗糖；

所述芽再生诱导培养基的成分包括：MS培养基添加有终浓度为0～2mg/L植物生长调节剂、8～12g/L琼脂和10～30g/L蔗糖；

所述根系诱导水培养液的成分包括：1/2MS培养基添加有终浓度为0.1～3mg/L植物生长调节剂，2～4g/L杀菌剂。

进一步地，所述植物生长调节剂为6-苄基嘌呤、α-萘乙酸、噻苯隆中的任意一种或多种；所述杀菌剂为多菌灵。

更进一步地，所述愈伤组织诱导培养基的成分包括：MS培养基添加有终浓度为2～3mg/L噻苯隆，0.1～0.15mg/Lα-萘乙酸，9.5g/L琼脂和30g/L蔗糖；

所述芽再生诱导培养基的成分包括：MS培养基添加有终浓度为0～0.6mg/L 6-苄基嘌呤(6-BA)、0～0.5mg/Lα-萘乙酸(NAA)、10g/L琼脂和20g/L蔗糖；

所述根系诱导水培营养液成分包括：1/2MS培养基，添加有终浓度为0.25～2mg/Lα-萘乙酸(NAA)，3g/L多菌灵。

进一步地，所述丹参为川丹参。

本发明还提供了一种丹参组培苗高效繁育方法，它是利用前述培养基栽培，具体步骤如下：

a、取丹参苗，剪切，接入愈伤组织诱导培养基中培养，得丹参愈伤组织；