[发明专利]羊水间充质干细胞的细胞外囊泡的制备方法

权利要求书

1.一种羊水间充质干细胞的细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将羊水间充质干细胞的培养上清在300g～500g的条件下离心，收集上清，获得粗提物；

将所述粗提物在12000g～15000g的条件下离心10分钟～15分钟后，取上清并使用0.22μm滤膜过滤，获得滤液；

将沉淀剂与所述滤液按照体积比1：(1～2)混合均匀，获得混合液，所述沉淀剂包括聚乙二醇、氯化钠和水，在100mL的所述沉淀剂中，所述聚乙二醇的质量为12g～25g，所述氯化钠的质量为5g～10g，所述聚乙二醇为PEG6000和PEG8000中的至少一种；及

将所述混合液在2℃～10℃条件下静置2小时以上后，在12000g～15000g条件下离心70分钟～90分钟后弃上清，获得羊水间充质干细胞的细胞外囊泡。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在100mL的所述沉淀剂中，所述聚乙二醇的质量为16g～25g，所述氯化钠的质量为5.5g～8g。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述沉淀剂与所述滤液的体积比为1：(1～1.5)。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在获得所述滤液的步骤中，离心的条件为：离心力为12000g～14000g，离心时间为10分钟～12分钟。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在获得所述粗提物的步骤中，离心的条件为：离心力为300g～400g，离心时间为5分钟～10分钟。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述混合液的静置时间为2小时～12小时；

和/或，所述混合液的静置温度为3℃～6℃。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，静置后的所述混合液的离心条件为：离心力为12000g～15000g，离心时间为70分钟～80分钟。

8.根据权利要求1～7任一项所述的制备方法，其特征在于，在将所述混合液离心并弃上清之后，还包括将离心获得的沉淀采用缓冲液重悬后再次离心并收获沉淀的步骤。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述再次离心的离心条件为：离心力为12000g～15000g，离心时间为30分钟～50分钟。

10.一种细胞外囊泡，其特征在于，采用权利要求1～9中任一项所述的羊水间充质干细胞的细胞外囊泡的制备方法制得。