[发明专利]肝特异性构建体、因子VIII表达盒及其使用方法

权利要求书

1.一种多核苷酸表达构建体，其包含含有绝缘子序列的至少一个间隔子序列、肝特异性增强子序列、启动子序列以及转基因。

2.如权利要求1所述的多核苷酸表达构建体，其还包含内含子序列，其中所述增强子序列包括野生型或突变的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白1增强子；和/或所述启动子序列包括野生型或突变的甲状腺素运载蛋白(TTR)启动子；和/或所述内含子序列包括野生型或突变的小鼠微小病毒(MVM)内含子序列。

3.如权利要求1或权利要求2所述的多核苷酸表达盒，其中所述绝缘子序列是SEQ IDNO:28、29和/或30中的任一个。

4.如权利要求1至3中任一项所述的多核苷酸表达盒，其包含侧接所述肝特异性增强子序列、所述启动子序列、所述内含子序列和所述转基因的两个间隔子序列。

5.如权利要求4所述的多核苷酸表达盒，其中所述绝缘子序列是SEQ ID NO:28、29、30和/或38。

6.如权利要求1至5中任一项所述的多核苷酸表达盒，其中所述转基因编码在血友病或溶酶体贮积病中缺少或缺乏的蛋白质。

7.如权利要求6所述的多核苷酸表达盒，其中所述转基因还编码一种或多种核酸酶。

8.一种多核苷酸表达构建体，其包含肝特异性增强子序列、启动子序列、如SEQ ID NO:15、16或17中任一者所示的内含子序列以及转基因。

9.如权利要求8所述的多核苷酸表达构建体，其中所述增强子序列包括野生型或突变的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白1增强子；和/或所述启动子序列包括野生型或突变的甲状腺素运载蛋白(TTR)启动子。

10.如权利要求8或权利要求9所述的多核苷酸表达盒，其还包含含有绝缘子序列的至少一个间隔子序列和/或多腺苷酸化信号。

11.如权利要求8至10中任一项所述的多核苷酸表达盒，其中所述转基因编码在血友病或溶酶体贮积病中缺少或缺乏的蛋白质。

12.如权利要求8至11中任一项所述的多核苷酸表达盒，其中所述转基因还编码一种或多种核酸酶。

13.一种多核苷酸表达构建体，其包含具有在SEQ ID NO:1-13中任一者的位置1、5、14、32和/或39处的突变的肝特异性增强子序列、启动子序列和转基因。

14.如权利要求13所述的多核苷酸表达构建体，其还包含内含子序列，其中所述启动子序列包括野生型或突变的甲状腺素运载蛋白(TTR)启动子；和/或所述内含子序列包括野生型或突变的小鼠微小病毒(MVM)内含子序列。

15.如权利要求13或14所述的多核苷酸表达盒，其还包含含有绝缘子序列的至少一个间隔子序列和/或多腺苷酸化信号。

16.如权利要求13至14中任一项所述的多核苷酸表达盒，其中所述转基因编码在血友病或溶酶体贮积病中缺少或缺乏的蛋白质。

17.如权利要求13至16中任一项所述的多核苷酸表达盒，其中所述转基因还编码一种或多种核酸酶。

18.一种AAV载体，其包含如权利要求1-17中任一项所述的多核苷酸表达构建体，其中所述多核苷酸表达构建体处于所述AAV载体的5’与3’倒置末端重复(ITR)之间。