[发明专利]一种诱导脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法

说明书

本发明实施例公开了一种诱导脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法。本发明将UC‑MSCs联合小分子化合物成功诱导分化为IPCs。在S1阶段，通过β‑巯基乙醇和Activin A的联合作用将UC‑MSC向内胚层分化，内胚层标志基因Foxa2与Sox17表达量较其它阶段显著上升(P0.001)；由于β‑巯基乙醇具有细胞毒性，在S2阶段通过及时撤去β‑巯基乙醇，使细胞更好的向下一阶段分化；在S3阶段，通过降低血清的浓度及加入bFGF、NA、Exendin‑4联合诱导细胞向胰腺祖细胞分化；在S4阶段，撤去血清，通过将烟酰胺与exendin‑4结合，可以最终诱导为成熟的β样细胞。

技术领域

本发明实施例涉及生物医药技术领域，具体涉及一种诱导脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法。

背景技术

近年来糖尿病的发病率呈逐渐上升趋势，给世界带来沉重的经济负担。干细胞是一种具备多项分化能力的细胞，具备向多个胚层分化的能力，其中就包括分化为胰岛β样细胞的内胚层。

UC-MSCs因为其来源方便、免疫原性低、增殖能力强成为诱导分化的候选细胞。在干细胞诱导分化的方法上有学者使用基因工程如通过慢病毒、腺病毒、逆转录病毒或质粒载体将胰腺发育相关的基因导入到干细胞中进行诱导分化，也获得不错的效果，但考虑到后期要将分化的细胞应用到临床方面，慢病毒和逆转录病毒等整合方法由于转基因的基因组变化而具有潜在的肿瘤形成风险，因此，需要去寻找一种更为安全有效的方法。

化学诱导法是利用小分子化合物组合将干细胞诱导分化成IPCs。小分子化合物无免疫原性，可控性强，易于操作，并且它们对于细胞的作用通常是可逆的。因此，研发出基于小分子化合物的诱导脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法具有重要的意义。

发明内容

为此，本发明提供一种联合小分子化合物的诱导脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

一种诱导脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，包括如下步骤：

UC-MSCs以2x10^5/孔的细胞铺于六孔板中，待细胞长满六孔板70％-80％时，加入S1阶段诱导液进行S1阶段培养；

第3-5天时更换为S2阶段诱导液进行S2阶段培养；

第8-10天时更换为S3阶段诱导液进行S3阶段培养；

第15-17天时更换为S4阶段诱导液进行S4阶段培养；

第20-24天时结束诱导。

在一些优选的实施例中，50ml所述S1阶段诱导液包括：(42.85-43.85)ml DMEM:F12、(4-5)ml 10％FBS、500ul 100x NA、50ul 1000x EGF、50ul 1000xβ-巯基乙醇、500ul100x青霉素-链霉素、50ul 1000x Activin A。作为优选，50ml所述S1阶段诱导液包括：43.85ml DMEM:F12、5ml 10％FBS、500ul 100x NA、50ul 1000x EGF、50ul 1000xβ-巯基乙醇、500ul 100x青霉素-链霉素、50ul 1000x Activin A。

在一些优选的实施例中，50ml所述S2阶段诱导液包括：(42.95-43.95)ml DMEM:F12、(4-5)ml 10％FBS、500ul 100x NA、50ul 1000x EGF、500ul100x青霉素-链霉素。作为优选，50ml所述S2阶段诱导液包括：43.95ml DMEM:F12、5ml 10％FBS、500ul 100x NA、50ul1000x EGF、500ul 100x青霉素-链霉素。