[发明专利]一株H9N2亚型禽流感病毒MDCK细胞冷适应减毒活疫苗株及其应用

说明书

本发明公开了一株H9N2亚型禽流感病毒MDCK细胞冷适应减毒活疫苗株及其应用，属于兽用药物领域。所述冷适应减毒活疫苗株保藏编号为CCTCC NO:V202240。所述冷适应减毒活疫苗株的培育方法，包括：以一株H9N2亚型禽流感流行毒株作为亲本毒株，在MDCK细胞中梯度降温培育获得冷适应减毒活疫苗株。本发明公开的冷适应减毒活疫苗株的培育方法可以摆脱对鸡胚的依赖，而且所培育的冷适应减毒活疫苗株可以刺激机体产生体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫，从而保护家禽不受H9N2禽流感病毒的侵扰。

技术领域

本发明涉及兽用药物领域，特别是涉及一株H9N2亚型禽流感病毒MDCK细胞冷适应减毒活疫苗株及其应用。

背景技术

禽流感是由禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的禽类高发性疾病，以精神沉郁、食欲减退、咳嗽和喷嚏等呼吸道症状为主要临床症状，是一种高发性、烈性和高度接触性的传染性疾病。H9N2禽流感病毒宿主要包括：水禽、野鸟和家禽（如：火鸡、鸡、鸭子等）。低致病性禽流感H9N2感染鸡群一般不会直接导致鸡的死亡，但会导致产蛋率下降以及生长迟缓，给养禽业造成巨大的经济损失。

目前我国H9N2亚型禽流感的防控主要依靠于全病毒灭活疫苗，全病毒灭活疫苗主要刺激机体产生体液免疫，现阶段临床结果表明全病毒灭活疫苗已经不能够很好地保护家禽免受当前H9N2亚型AIV流行毒株的侵扰，而且灭活疫苗存在以下缺点：接种量大、免疫接种次数多、免疫时间短以及接种部位应激大。另外，灭活疫苗的制备主要依赖于鸡胚生产，如果鸡胚供应量不足很容易出现无疫苗可用的情况。现有的数据表明大量的家禽养殖场免疫H9N2禽流感疫苗后仍然爆发H9N2禽流感疫情。禽流感病毒是一种从呼吸系统到全身败血症等多种症状的禽类传染病，全病毒灭活疫苗不能刺激机体产生呼吸道粘膜免疫和细胞免疫，虽然体液免疫具有很高的水平，但是仍然不能保护鸡群免受H9N2禽流感病毒的侵扰。

活疫苗在刺激机体产生高水平中和抗体的同时，可以引起细胞免疫，还可以刺激鼻腔黏膜产生分泌型抗体。目前，俄罗斯和美国在冷适应减毒活疫苗方面的研究处于世界领先水平，已培育出A/Ann Arbor/6/60（H2N2）、B/Ann Abor/1/66、A/Leningard/134/17/57（H2N2）和B/USSR/60/69等减毒基因供体株。2003年6月17日美国食品和药监局批准一种冷适应、减毒、三价活疫苗FluMist，这是全球第一支流感减毒活疫苗，随后该疫苗在欧盟和加拿大也被获得批准使用。该疫苗已被证实具有安全性和有效性，具有加强控制流行性流感的潜力，而且在3-16岁儿童也被证实是安全有效的。以上所述表明：活疫苗在预防和控制流感方面具有良好的前景，是一种可选择的候选疫苗株。冷适应减毒活疫苗依赖细胞来繁殖病毒，可以摆脱流感病毒生产依靠鸡胚的这一缺陷，而且冷适应减毒活疫苗免疫机体后产生体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫，可以摆脱全病毒灭活疫苗不能刺激机体产生粘膜免疫的缺陷。能够很好地保护禽类免受H9N2禽流感的侵扰，极大地改善当前灭活疫苗免疫之后仍然发病的困境。

发明内容

本发明的目的是提供一株H9N2亚型禽流感病毒MDCK细胞冷适应减毒活疫苗株及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，可以摆脱对鸡胚的依赖，而且可以刺激机体产生体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫，从而保护家禽不受H9N2禽流感病毒的侵扰。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一株H9N2亚型禽流感病毒MDCK细胞冷适应减毒活疫苗株，所述冷适应减毒疫苗株分类命名为H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Qingyuan/141-25-ca/2021,保藏时间为2022年5月22日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学；保藏编号为CCTCC NO:V202240。

本发明还提供所述的一株H9N2亚型禽流感病毒MDCK细胞冷适应减毒活疫苗株的培育方法，包括：以一株H9N2亚型禽流感流行毒株作为亲本毒株，在MDCK细胞中梯度降温培育获取H9N2亚型禽流感病毒MDCK细胞冷适应减毒活疫苗株。