[发明专利]结核分枝杆菌特异性刺激抗原、试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种结核分枝杆菌特异性刺激抗原、试剂盒及其应用，本发明首先提供了TB27.4抗原作为检测结核分枝杆菌感染的刺激抗原的应用，本发明还提供了包括TB27.4抗原的刺激抗原组合，其还包括ESAT‑6抗原和CFP‑10抗原。本发明提供的刺激抗原组合可在不降低特异性的情况下显著降低结核感染的漏检率。本发明还提供了包括该刺激抗原组合的试剂盒，其具有性能好，检出率高等优点，对传染病防控具有实际和广泛的正向作用。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种结核分枝杆菌特异性刺激抗原、试剂盒及其应用。

背景技术

结核分枝杆菌是一种典型的胞内感染菌，人体对其免疫机制主要是以T细胞为主的细胞免疫。结核分枝杆菌侵入呼吸道后，原肺泡中未活化的树突状细胞(Dendriticcells,DC)抗菌活性弱，不能防止所吞噬的结核分枝杆菌生长，但可将结核分枝杆菌吞噬并带到他处，提呈抗原，使周围T淋巴细胞致敏，致敏的T淋巴细胞可产生多种细胞因子(INF-γ、IL-2、IL-6与TNF-α等)，这些细胞因子共同作用，杀死病灶中的结核分枝杆菌。根据这一免疫机制，通过对已感染结核分枝杆菌的患者及健康人血液中的细胞因子进行分析对比，发现感染结核分枝杆菌的患者其血液中INF-γ、IL-2、IL-6、TNF-α的浓度明显升高。

γ-干扰素，又称IFN-γ或Ⅱ型干扰素，是由有丝分裂原刺激T淋巴细胞产生。干扰素是一种高效的抗病毒生物活性物质，又是一种具有广泛免疫调节作用的淋巴因子。该产品广泛运用于干扰素释放实验(IGRA)试剂盒。刺激抗原作为刺激T细胞产生细胞因子的重要组分，在此类试剂盒中起到了至关重要的作用。

然而市场现售的结核特异性细胞因子检测试剂盒使用的ESAT-6、CFP-10联用的方案均存在漏检的问题，鉴于结核病是传染性较强的疾病，因此存在降低其漏检率的需求。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种结核分枝杆菌特异性的刺激抗原、试剂盒及其应用。

为此，第一方面，本发明提供TB27.4抗原作为检测结核分枝杆菌感染的刺激抗原的应用。

本发明的第二方面，提供一种用于检测结核分枝杆菌感染的刺激抗原组合，所述刺激抗原组合包括TB27.4抗原。

进一步，所述刺激抗原组合还包括ESAT-6抗原和CFP-10抗原。

本发明通过混合TB27.4、ESAT-6、CFP-10三种结核特异性抗原作为刺激抗原，发现其对T淋巴细胞的刺激效果显著高于仅混合ESAT-6与CFP-10的对照组，因此，添加TB27.4可以有效提高刺激抗原的刺激效果，添加了TB27.4的刺激抗原可以作为更优的试剂盒组分以提高试剂盒性能，降低漏检率。

进一步，所述刺激抗原组合中，TB27.4抗原、ESAT-6抗原和CFP-10抗原的质量之比为1:1-5:1-5；例如1:1:1、1:2:2、1:5:5等。

本发明的第三方面，提供一种用于检测结核分枝杆菌感染的反应体系，所述反应体系包括本发明第二方面所述的刺激抗原组合。

进一步，所述反应体系中，所述TB27.4抗原的浓度为2-50μg/ml；例如2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml等。

在一些实施方式中，所述刺激抗原组合包括TB27.4抗原、ESAT-6抗原和CFP-10抗原；所述反应体系中，所述ESAT-6抗原和CFP-10抗原的浓度各自独立地选自2-50μg/ml；例如2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml等。

在某实施方式中，所述反应体系中，所述TB27.4抗原的浓度为10μg/ml，ESAT-6抗原的浓度为10μg/ml，所述CFP-10抗原的浓度为10μg/ml。