[发明专利]复合中性蛋白酶稳定剂及其应用

说明书

本发明涉及复合蛋白酶稳定剂及其应用，特别是指一种复合中性蛋白酶稳定剂及其应用。采用有效量的Na₂SO₄、蛋白胨、Aprotinin制成复合中性蛋白酶稳定剂。本发明解决了现有技术中存在的对中性蛋白酶JW‑3酶活保存率低等问题。具有原料来源及制备简单易行，应用于中性蛋白酶JW‑3后酶活保存率显著优于现有产品及文献报道等优点。

技术领域

本发明涉及复合蛋白酶稳定剂及其应用，特别是指一种复合中性蛋白酶稳定剂及其应用。

背景技术

中性蛋白酶(Protease)是一种由内肽酶组成的内切酶，能够在中性或弱酸、弱碱性环境中有催化蛋白质水解产生游离氨基酸和多肽片段的酶的总称，其最适作用pH值为6.0～7.5。中性蛋白酶作用条件温和，催化效率较高，被广泛应用于食品、医药、皮革、饲料、化工和废弃物处理。

目前商品化的中性蛋白酶制剂以固体粉末为主要剂型。粉末剂型虽然储存和运输方便，但中性蛋白酶易发生自溶现象，即使低温冷冻干燥，也会损失大量酶活。液体蛋白酶由于外界条件(高温高湿等)的限制，运输过程中的储存稳定性存在着很大的问题，主要表现为长途运输中胀气、高温条件下酶活急剧下降、存放时间过长导致酶制剂酶活性下降、出现浑浊现象等。

国内在售的液体中性蛋白酶种类极少，均为进口产品且价格高昂。拉丁文名称为Bacillus subtilis，保藏编号为CGMCC No.14837的枯草芽孢杆菌系申请人通过基因重组的方法构建的脱毛用工程菌，其发酵生产的终产物为中性蛋白酶JW-3。

本领域人员公知，在25℃～40℃的保存条件下硼砂能够更好地减缓酶活的损失。经申请人试验证实，对于中性蛋白酶JW-3添加硼砂稳定剂在温度为40℃的条件下保存2天后，酶活保存率为60％左右；而不添加任何保护剂的中性蛋白酶JW-3在温度为40℃的条件下保存2天后酶活保存率为70％左右。公开号为CN108048441A的专利文献中公开了一种用于稳定洗衣液中蛋白酶的复合稳定剂，所述稳定剂包含柠檬酸铵钙和烷基糖苷表面活性剂，在添加复合稳定剂条件下37℃保存3周后酶活保存率达到84.3％和71.5％。但中性蛋白酶JW-3在柠檬酸铵钙和烷基糖苷表面活性剂中稳定性较差，在温度为37℃的条件下保存3周后酶活保存率为60％左右。公开号为CN108977428A的专利文献中公开了菠萝蛋白酶稳定剂及其制备方法和应用，其稳定剂由D-异抗坏血酸钠、L-半胱氨酸、乙二胺四乙酸二钠、乙酸钠、山梨酸钾和维生素B9组成，但中性蛋白酶JW-3在该组分下酶活保存率为60％左右。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复合中性蛋白酶稳定剂及其应用，可有效解决中性蛋白酶JW-3酶活保存率低的问题。

本发明的整体技术构思是：

复合中性蛋白酶稳定剂，包括单位质量份的原料：

Na₂SO₄ 10～20；蛋白胨2～10；Aprotinin 60～200U/ml；pH＝6.0-7.0。

复合中性蛋白酶稳定剂在中性蛋白酶制剂制备中的应用。

本发明的具体技术特征还有：

优选的技术方案是，Aprotinin由北京索莱宝科技有限公司生产，其CAS为90087-70-1，货号为A8260。

优选的技术方案是，pH采用NaOH或HCl调节。

复合中性蛋白酶稳定剂在中性蛋白酶制剂制备中的应用，包括如下步骤：

A、选用拉丁文名称为Bacillus subtilis，保藏编号为CGMCC No.14837的枯草芽孢杆菌发酵制备的中性蛋白酶JW-3，高速离心取上清液，过滤，稀释制成酶活为2000U/mL的蛋白酶水溶液；