[发明专利]一种特异性生物提取蛋白-γ蛋白的制备方法

说明书

本申请涉及生物医药技术领域，具体公开了一种特异性生物提取蛋白‑γ蛋白的制备方法，所述特异性生物提取蛋白‑γ蛋白的制备方法，包括将轮状病毒抗原经处理液进行预处理后，获得处理抗原；将处理抗原加佐剂充分乳化制得免疫疫苗；将免疫疫苗用于鸡免疫接种，收集免疫鸡蛋；将免疫鸡蛋经蛋黄分割获得卵黄，将卵黄、磷酸溶液、聚乙二醇搅拌分散均匀后，静置离心，收集上清液，将上清液经半透膜透析提纯后喷雾干燥，制得所需的特异性生物提取蛋白‑γ蛋白。上述方法制得的γ蛋白纯度高、稳定性好、特异性和灵敏度高，可用于制备口服特异性γ蛋白抗体，免疫干扰小，其制备方法简单，制备成本低，可得广泛应用。

技术领域

本申请涉及生物医药技术领域，更具体地说，它涉及一种特异性生物提取蛋白-γ蛋白的制备方法。

背景技术

轮状病毒(Rotavirus，简称RV)是一种双链核糖核酸病毒，属于呼肠孤病毒科。轮状病毒是引起全球5岁以下儿童重症腹泻的首位病原体，重症轮状病毒肠炎主要发生于2个月～3岁的婴幼儿，常并发脱水、酸中毒及电解质紊乱，严重威胁着患儿的身体健康。轮状病毒感染途径为粪-口途径，主要感染小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。轮状病毒总共有七种，以英文字母编号为A、B、C、D、E、F与G。其中A、B、C三个组能够感染人类，而A组是最为常见的一种，人类轮状病毒感染超过90％的案例也都是A组造成的。

轮状病毒肠炎一旦发生目前尚无特效药物治疗，当前预防和控制轮状病毒感染最有效手段的手段是疫苗。口服轮状病毒活疫苗可预防轮状病毒的感染和减少重症轮状病毒肠炎的发生，但相关技术中，疫苗保护率仅能达到80％左右。

鸡卵黄抗体(Immunoglobulin Yolk，IgY)，又名γ蛋白，是通过特异性受体介导刺激下，由禽类B淋巴细胞产生并转移到卵黄中的多克隆抗体。由于禽类和人亲缘关系较远，种系差别大，使得IgY对哺乳动物高保守蛋白具有强反应性，非常少量的抗原刺激就能在免疫鸡蛋黄中获得大量且能持续表达的特异性IgY；同时使得IgY在检测诊断上具有稳定性好、特异性和灵敏度高、免疫干扰小、背景低等优点。IgY与抗原相结合，能有效地消除入侵机体的病原体，中和病原体所产生的毒素，是免疫环境的重要组成部分。

随着对IgY领域研究和应用的不断深入，IgY的应用前景越来越宽阔，已有研究证明，口服特异性IgY抗体对牛和人轮状病毒具有抵抗作用，但现有的口服特异性IgY抗体对牛和人轮状病毒的抵抗作用有限，无法实现对轮状病毒肠炎的有效防治。

发明内容

为了实现对轮状病毒肠炎的有效防治，本申请提供了一种特异性生物提取蛋白-γ蛋白的制备方法。

本申请提供了一种特异性生物提取蛋白-γ蛋白的制备方法，采用如下的技术方案：一种特异性生物提取蛋白-γ蛋白的制备方法，具体包括以制备下步骤：

S1、准备抗原：将轮状病毒抗原经处理液进行预处理后，获得处理抗原；

S2、制备免疫疫苗：将步骤S1中的处理抗原加佐剂充分乳化制得免疫疫苗；

S3、获取免疫鸡蛋：将步骤S2所得免疫疫苗用于鸡免疫接种，收集免疫鸡蛋；

S4、提取卵黄蛋白：将步骤S3中的免疫鸡蛋经蛋黄分割获得卵黄，按质量比1:8-12:2-3，将卵黄、0.1mol/L磷酸溶液、聚乙二醇搅拌分散均匀后，静置离心，收集上清液，将上清液经半透膜透析提纯后喷雾干燥，制得所需的特异性生物提取蛋白-γ蛋白。

通过采用上述技术方案，本申请制得的γ蛋白纯度高、稳定性好、特异性和灵敏度高，可用于制备口服特异性γ蛋白产品，免疫干扰小，其制备方法简单，制备成本低，可得广泛应用。

优选的，所述步骤S1中轮状病毒抗原包括A组轮状病毒抗原、B组轮状病毒抗原和C组轮状病毒抗原；A组轮状病毒抗原、B组轮状病毒抗原和C组轮状病毒抗原的质量比为89-95:1-5:1-3。