[发明专利]一种提高杏树坐果率的方法在审
| 申请号： | 202210607166.4 | 申请日： | 2022-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN114774465A | 公开（公告）日： | 2022-07-22 |
| 发明（设计）人： | 吕丽霞;王秀荣;王维;贾庆冰;王毅敏;丁洁;刘文婷;杨振华;张晓宁;金颖璐;刘晓婕 | 申请（专利权）人： | 张家口市农业科学院（河北省高寒作物研究所） |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/53;A01H5/08;A01H6/74 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 菅士腾 |
| 地址： | 075032 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 杏树 坐果 方法 | ||
1.一种提高杏树坐果率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)从苹果叶片中提取总RNA，并反转录为cDNA；
(2)用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对，以所述cDNA为模板，进行PCR扩增，得到扩增产物；
(3)将所述扩增产物转化入杏树叶片中，通过组织培养，得到重组杏树植株。
2.根据权利要求1所述的提高杏树坐果率的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述PCR扩增的扩增体系为：10mM dNTP 2μL，10×PCR Buffer 10μL，10μM上游引物5μL，10μM下游引物5μL，模板cDNA 2μL，25mM MgSO4 10μL，5U/μL Taq DNA polymerase 0.2μL，ddH2O补足至100μL。
3.根据权利要求1所述的提高杏树坐果率的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述PCR扩增的扩增程序为：94℃预变性3min；循环情况为94℃变性45s，55℃退火30s，68℃延伸2min，共35个循环；72℃延伸5min。
4.根据权利要求1所述的提高杏树坐果率的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述扩增产物插入植物转化载体后，再转化入杏树叶片。
5.根据权利要求4所述的提高杏树坐果率的方法，其特征在于，所述扩增产物插入植物转化载体的具体操作包括：先将pCAMBIA1303质粒和pSB166质粒连接，得到重组质粒pCSB，在将所述扩增产物插入所述重组质粒pCSB中。
6.根据权利要求5所述的提高杏树坐果率的方法，其特征在于，所述pCAMBIA1303质粒和pSB166质粒连接的酶切体系为：质粒14μL，EcoR Ⅰ 2μL，HindⅢ 2μL，10×Tango 2μL。
7.根据权利要求5所述的提高杏树坐果率的方法，其特征在于，将所述扩增产物插入所述重组质粒pCSB中的酶切体系为：质粒/DNA 11μL，Sal Ⅰ 2μL，Kpn Ⅰ 2μL，10×Tango 2μL，1％BSA 4μL。
8.根据权利要求4所述的提高杏树坐果率的方法，其特征在于，所述转化入杏树叶片的方法为农杆菌转化。
9.根据权利要求8所述的提高杏树坐果率的方法，其特征在于，所述农杆菌转化的具体操作包括：取杏树上有2-3片叶片的顶芽，将叶片背面划伤，在含有所述扩增产物的农杆菌的菌液中浸染。
10.根据权利要求9所述的提高杏树坐果率的方法，其特征在于，所述浸染时间为5min。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于张家口市农业科学院（河北省高寒作物研究所），未经张家口市农业科学院（河北省高寒作物研究所）许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202210607166.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
