[发明专利]一种用于诊断慢性疼痛-抑郁共病的ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了一种基因编码蛋白在制备慢性疼痛‑抑郁共病诊断产品中的应用，所述基因编码蛋白为WDR33蛋白。本发明还公开一种慢性疼痛‑抑郁共病诊断的ELISA试剂盒，试剂盒包括载有WDR33蛋白第一抗体的包被板、带有检测标记的WDR33第二抗体、检测标记、检测检测标记工具和系列包含已知浓度的WDR33蛋白的溶液。本发明对于WDR33蛋白的检测方法区别于传统Western Blot，ELISA检测方法更为简便，且可进行定量分析，并可同时检测大量样本，增加检测结果的准确性和可信度。针对于WDR33的ELISA检测方法及检测试剂盒将有益于慢性疼痛‑抑郁共病的临床诊断和治疗，也为疼痛‑抑郁基础研究增加了新的检测工具。

技术领域

本发明涉及生物技术和免疫学领域，具体涉及检测慢性疼痛-抑郁共病诊断指标WDR33的抗体、试剂盒以及他们的用途。

背景技术

疼痛是与潜在或实际存在的组织损伤相关的不愉快的主观感觉和情感体验。根据疼痛持续的时间可分为急性和慢性疼痛。慢性疼痛是以躯体疼痛不适为主要症状并持续时间超过三个月的疾病。根据流行病学调查，伴有慢性疼痛的患者占普通人群的20-45%。由于躯体化的症状，慢性疼痛造成许多患者劳动力的丧失，每年消耗大量医疗费用，形成了严重的社会问题。越来越多的研究表明，抑郁、焦虑等心理因素与慢性疼痛的发生及其严重程度密切相关。一项前瞻性的的研究证明，疼痛时间超过三个月的带状疱疹病人与不存在慢性疼痛的病人相比，前者往往伴有严重的抑郁症状。抑郁症患者在临床治疗过程中常常自述有慢性疼痛症状的出现。抑郁症是具有高发病率、高复发率和高致残率等特点的一种常见的精神疾病。慢性疼痛和抑郁症多具有难治性和复发性的特点，两者共病存在时，更是大大加深了治疗难度。

慢性疼痛是由生物、心理和社会等多种因素共同作用引起的以疼痛为主要表现的临床综合征。慢性疼痛的病因较为复杂，可由先天或者后天获得；可由躯体性疾病所致，也可由精神疾病引起。抑郁症的发病机制至今尚未明确，只形成相应的几种假说。慢性疼痛可诱导抑郁症的产生，而抑郁症则会加重慢性疼痛的症状，延长慢性疼痛的疗程。及早的发现慢性疼痛患者合并的抑郁症状并加以治疗，将大大提升慢性疼痛患者的治疗效果。

慢性疼痛及抑郁症的诊断皆为主观自述或自评量表得分，没有一个统一标准，量表信息的缺失及病史不清常常使患者达不到满意的治疗效果。因此，寻找客观的诊断指标对于疼痛-抑郁共病的诊断显得至关重要。

遗传因素在慢性疼痛和抑郁症的发生发展中较为重要，组蛋白、DNA等遗传物质的修饰都都参与其中。一项遗传学调查研究显示，抑郁和慢性疼痛存在86%的遗传相关性。微小RNA（miRNA）是一种长度为18-22个核苷酸的微小非编码RNA，作为基因表达的转录后调节因子发挥作用。通过与靶基因3’端非编码区靶向结合，抑制基因翻译或诱导转录后mRNA的降解，以此来调控基因的表达水平。前期，我们在发明专利202210148718.X中申请使用血浆miRNA-351-5p预测慢性疼痛-抑郁共病，在后期工作中我们使用生物信息学的方法，筛选出该miRNA所靶向的基因WDR33，miRNA-351-5p在抑郁易感小鼠中表达量降低，WDR33则将在疼痛-抑郁易感模型中表达量增加。所以，以该基因作为出发点，设计针对检测WDR33的ELISA试剂盒，及早进行抑郁症状的干预，显著改善慢性疼痛的治疗疗效。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测WDR33蛋白的抗体夹心ELISA方法，试验结果表明与该蛋白相作用的miRNA-365-5p在慢性疼痛-抑郁动物模型血液样本中明显降低。本发明可用于检测临床患者血清，同时也可以用于基础研究中的的各种生物学样本（如细胞培养上清液、细胞溶解液）中的WDR33蛋白，以及用于检测来自动物模型的生物学样品中的WDR33蛋白。WDR33蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明的目的还在于提供一种用于检测WDR33蛋白的抗体夹心ELISA试剂盒。本发明制得的ELISA试剂盒为慢性疼痛-抑郁的基础研究和临床应用研究提供了有利的工具。

一种检测WDR33蛋白的ELISA方法，包括以下步骤：