[发明专利]一种基于表面增强拉曼散射的细胞传感器及其应用

权利要求书

1.一种基于表面增强拉曼散射的细胞传感器，其特征在于：该细胞传感器是将表面增强拉曼散射探针导入人源肝细胞系构建得到的；

所述的表面增强拉曼散射探针是以金纳米为检测基底，基因损伤效应分子抗体为识别单元，拉曼分子为报告单元，SH-PEG-NH₂为稳定链，穿膜肽为辅助穿透单元制备得到的；

所述的基因损伤效应分子抗体为γH2AX抗体；

所述的拉曼分子包括4-巯基苯甲腈、4-巯基苯甲酸和4-巯基苯硼酸中的至少一种；

所述的人源肝细胞系为人肝细胞L02、人肝癌细胞HepG2和人肝癌细胞Hepa1-6中的至少一种；

所述的穿膜肽包括TAT和NLS中的至少一种；

所述的表面增强拉曼散射探针采用以下步骤制备：

步骤（1）：采用柠檬酸三钠还原法制备金纳米溶液：

步骤（2）：SH-PEG-NH₂修饰金纳米：将SH-PEG-NH₂加入到步骤（1）制备的金纳米溶液中搅拌反应得到SH-PEG-NH₂修饰的金纳米溶液；

步骤（3）：拉曼分子修饰金纳米：将拉曼分子溶液缓慢加入到步骤（2）制备的金纳米溶液中搅拌反应，然后离心弃上清并加入超纯水分散均匀得到SH-PEG-NH₂和拉曼分子修饰的金纳米溶液；

步骤（4）：基因损伤效应分子抗体修饰金纳米：向步骤（3）制备的金纳米溶液中加入5%的戊二醛溶液搅拌反应，然后离心弃上清并加入超纯水分散均匀得到戊二醛化的金纳米溶液，再加入基因损伤效应分子抗体水溶液孵育后离心弃上清并加入超纯水分散均匀得到基因损伤效应分子抗体修饰的金纳米溶液；

步骤（5）：穿膜肽修饰金纳米：将穿膜肽加入到步骤（4）制备的金纳米溶液中，搅拌反应，然后离心弃上清并用含1%BSA的PBS复溶并分散均匀得到表面增强拉曼散射探针。

2.根据权利要求1所述的细胞传感器，其特征在于，所述的金纳米的粒径为10-50 nm。

3.根据权利要求1所述的细胞传感器，其特征在于，步骤（1）中采用柠檬酸三钠还原法制备金纳米溶液的过程为：将0.01%的HAuCl₄水溶液加热至沸腾，迅速加入1%柠檬酸三钠水溶液，煮沸7～10min；其中，0.01%HAuCl₄水溶液与1%柠檬酸三钠水溶液体积比为20:1～100:1。

4.根据权利要求1所述的细胞传感器，其特征在于，

步骤（2）中所述SH-PEG-NH₂分子量为2000-5000；所述金纳米与SH-PEG-NH₂的摩尔比为1:1×10³～1:2×10⁶；

步骤（3）中所述的金纳米与拉曼分子的摩尔比为1:1×10³～1:1×10⁶；

步骤（4）中所述的金纳米与戊二醛的摩尔比为1:1×10³～1:2×10⁶；所述的金纳米与基因损伤效应分子抗体的投料比为5pmol：2 μL～5nmol：2 μL；

步骤（5）中所述的金纳米与穿膜肽的摩尔比为1: 1×10²～1×1:10⁵。

5.根据权利要求1所述的细胞传感器，其特征在于，步骤（2）、步骤（3）和步骤（5）中所述搅拌反应的时间各自独立的为搅拌5~10小时；步骤（4）中所述搅拌反应的时间为1~3小时，所述孵育的条件为25～38℃孵育1~3小时。

6.权利要求1、3~5中任意一项所述的细胞传感器在基因毒性杂质评价中的应用。