[发明专利]一种干细胞外泌体高纯度提取方法在审
| 申请号： | 202210576675.5 | 申请日： | 2022-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN114736855A | 公开（公告）日： | 2022-07-12 |
| 发明（设计）人： | 伯古;颜千;黄璐;夏思东;夏慧;杜兰;黄田;吴靖文;叶犇;涂传发 | 申请（专利权）人： | 武汉市舍巴精准医学科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 武汉臻诚专利代理事务所(普通合伙) 42233 | 代理人： | 胡星驰 |
| 地址： | 430030 湖北省武汉市*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 干细胞 外泌体高 纯度 提取 方法 | ||
1.一种干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)收集外泌体原液；
(2)外泌体稳定：将步骤(1)获得的外泌体原液与PEG混合后，使得PEG的浓度在1.6％至2.5％之间，孵育1～3h,获得稳定的外泌体交联体系；
(3)外泌体保护：在步骤(2)中获得的外泌体交联体系中，加入蔗糖溶液使的体系中蔗糖浓度在10％至15％，获得外泌体超速离心体系；
(4)富集提纯：将步骤(3)中获得的外泌体一次或反复多次超速离心进行富集，获得提纯的外泌体沉淀。
2.如权利要求1所述的干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，还包括以下步骤：
(5)清洗保存：将步骤(4)中获得的提纯的外泌体沉淀，采用海藻糖或PBS清洗并重悬，获得人脐带间充质干细胞外泌体保存。
3.如权利要求2所述的干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，采用海藻糖重悬。
4.如权利要求2所述的干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，步骤(5)所述清洗条件：110000g，2-6℃离心1-2h；重悬条件：2000g，4℃离心10-20min。
5.如权利要求1所述的干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：收集干细胞培养液上清，去除细胞碎片及杂质，获得外泌体原液，优选在相对离心力200g～300g下离心8-10分钟去除细胞碎片。
6.如权利要求1所述的干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，所述步骤(2)控制孵育温度在2～6℃，使得PEG分子交联成网状结构。
7.如权利要求1所述的干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，步骤(2)所述PEG溶液浓度在5％至10％。
8.如权利要求1所述的干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，步骤(2)所述PEG分子量在4000到6000。
9.如权利要求1所述的干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，步骤(3)所述蔗糖溶液浓度在30％至50％。
10.如权利要求1所述的干细胞外泌体高纯度提取方法，其特征在于，步骤(4)所述超速离心条件2-6℃、110000g低温离心1-2h。
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