[发明专利]一种负载血小板膜包被氧化铈的Gelma凝胶的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种负载血小板膜包被氧化铈的Gelma凝胶的制备方法及应用，其制备方法包括以下步骤：通过一步无模板溶剂热法制备出纳米级二氧化铈颗粒；收集抗凝新鲜全血经离心、洗涤、分离血小板，血小板经反复冻融提取出血小板膜并制成纳米级血小板膜囊泡；将上述纳米级二氧化铈和纳米级血小板膜囊泡混合，经磁珠涡旋、抽提、离心、干燥，获得血小板膜包被二氧化铈颗粒；取GelMa冻干粉溶于水中，并加入光引发剂，制成预凝胶溶液，将预凝胶溶液与血小板膜包被二氧化铈颗粒混合，在紫外光照射下，获得负载血小板膜包被氧化铈的Gelma凝胶。本发明通过构建一种凝胶装载仿生物膜伪装纳米颗粒系统，促进糖尿病创面愈合。

技术领域

本发明涉及糖尿病创面治疗凝胶领域，具体涉及一种负载血小板膜包被氧化铈的Gelma凝胶的制备方法及应用。

背景技术

目前，全球有6.4％的人口患糖尿病，这一比例持续增长，2030年预计将接近至7.5-8％，糖尿病创面愈合不良是糖尿病患者最常见的并发症，约有25％的人在其病程中会患上糖尿病性伤口溃疡。其中25％的糖尿病足溃疡患者需要进行截肢手术治疗。手术后，患对侧溃疡的患者比例达50％，5年死亡率约为50％。

糖尿病引起的慢性创面不愈合是一个复杂的病理过程。它们主要由新生血管生成缺陷、过度炎症引起。糖尿病血管生成缺陷严重限制了创面组织所需的氧气和营养物质，同时高糖伤口环境改变线粒体电子链的功能,使胞内超氧自由基的生成增多，活性氧生成显著增加，ROS的过度累计会损伤组织内源性干细胞、对蛋白质、脂质和核酸产生不可逆的修饰作用，从而极大地损害了细胞的再生潜力。根据以上病理特征需设计合适的药物敷料糖尿病伤口。

目前富血小板血浆广泛用于治疗慢性创面。在实际应用，为局部伤口提供液体治疗是具有挑战性的，因为液体不易留在伤口。解决这一问题的一种方法是使用水凝胶递药系统，它可以输送有益地生长因子或细胞的同时保持湿润的伤口环境。传统制备富血小板凝胶(简称：PRP凝胶；英文名：PRP Gel)的方法是通过活化凝血酶。然而，凝血酶可以完全破坏血小板，导致生长因子的爆发性释放，该特性可能导致创面修复初期组织增生。并且爆发的生长因子难以在目的区域形成最佳的有效浓度并持续发挥作用。降低富血小板血浆的长期治疗效果。

发明内容

鉴于目前存在的上述不足，本发明提供一种负载血小板膜包被氧化铈的Gelma凝胶的制备方法及应用，本申请通过构建一种凝胶装载仿生物膜伪装纳米颗粒系统，通过使用甲基丙烯酸酐化明胶(Gelatin Methacryloyl，GelMa)，其较一般凝胶具有良好的生物学特性和可调的物理特性，具有支持伤口微环境的功能；血小板膜诱饵吸引患者自身血小板，并激活血小板多种功能，修复糖尿病创面血管生成受损。纳米级二氧化铈颗粒具有高效清除ROS的活性，不仅可以对有害的氧化损伤微环境进行改造，还可以保护自身血小板不受ROS诱导的损伤。本发明通过GelMa装载血小板膜包封纳米级二氧化铈颗粒促进糖尿病创面愈合。

为了达到上述目的，本发明提供一种负载血小板膜包被氧化铈的Gelma凝胶的制备方法，具体包括以下步骤：

步骤一：通过一步无模板溶剂热法制备出纳米级二氧化铈颗粒；

步骤二：收集抗凝新鲜全血经离心、洗涤、分离血小板，血小板经反复冻融提取出血小板膜并制成纳米级血小板膜囊泡；

步骤三：将步骤一制备的纳米级二氧化铈和步骤二提取出的纳米级血小板膜囊泡混合，经磁珠涡旋、抽提、离心、干燥，获得血小板膜包被二氧化铈颗粒；

步骤四：取GelMa冻干粉溶于水中，并加入光引发剂，制成预凝胶溶液，将预凝胶溶液与血小板膜包被二氧化铈颗粒混合，在紫外光照射下，获得负载血小板膜包被氧化铈的Gelma凝胶。

依照本发明的一个方面，所述步骤三中的纳米级二氧化铈与血小板膜囊泡混合具体为将纳米级二氧化铈、纳米级血小板膜囊泡分别加PBS溶液，经溶解、水浴超声后，再将两者混合。