[发明专利]一种血管紧张素转化酶抑制剂专用纸芯片及检测分析方法

说明书

本发明涉及一种检测分析专用纸芯片及检测方法，将血管紧张素转化酶抑制剂筛选过程在纸芯片上实现，基于血管紧张素转化酶可将底物马尿酰甘氨酰甘氨酸(HGG)分解为马尿酸和甘氨酸二肽，甘氨酸二肽可与茚三酮反应产生紫色配合物，显色强度与酶活性呈正比，包括10大步骤。本发明同现有技术相比，具有检测速度快、准确度高、样品用量少、能耗低、污染小、成本低等优点，且纸芯片携带方便、操作简单，制作的3DμPAD用于血管紧张素转化酶抑制剂筛选无需进行特殊的样品预处理，可直接进行定量分析，可用于酶抑制剂类药物的活性筛选，在临床诊断、食品质量控制和环境监测等领域有着广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及一种检测分析专用纸芯片及检测方法，特别涉及一种血管紧张素转化酶抑制剂筛选专用3D微流控纸芯片及检测分析方法。

背景技术

血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme，ACE)又称激肽酶II或肽基-羧基肽酶。研究表明，ACE可催化血管紧张素I(十肽)水解成八肽的血管紧张素II，使血管进一步收缩，血压升高。因此，ACE抑制剂(ACEI)广泛应用于治疗高血压、心力衰竭、心肌梗塞等疾病。由于ACE活性测定各种参考值不尽相同，与年龄、性别及血清血管紧张素转换酶(SACE)相关，国内外尚有争论。目前，ACE的活性检测常用方法包括分光光度法、荧光光度法、高效液相色谱法、酶偶联法、毛细管电泳法等。分光光度法需用乙酸乙酯萃取产物马尿酸，步骤繁琐；荧光光度法、HPLC和毛细管电泳法对仪器设备要求高，难以在一般实验室使用；酶偶联法适用于手工操作，但底物马尿酸双甘肽与酶反应产物马尿酸有相同紫外吸收峰，且血脂较高时易产生混浊。

微流控纸芯片，也称微流控纸分析器件(microfluidic paper-based analyticaldevices，μPAD)，微流控纸芯片是由Whitesides组于2007年首次提出，是继HPLC和毛细管电泳(CE)后又一强有力的分离分析方法，它用纸张作为基底代替了玻璃、硅、高聚物等材料，通过各种加工技术，在纸上加工出具有一定结构的亲/疏水微细通道网络及相关分析器件，构建“纸上微型实验室”(lab-on-paper)。除了具有传统微流控芯片的样品用量小、分析快速等特点。μPAD分析中的检测方法主要有比色检测、电化学检测、化学发光检测以及电化学发光检测等四种。其中，比色法不需要特殊的仪器设备，是纸芯片分析中最常用的一种检测方法。它主要通过显色反应(或反应后颜色消失)，使待检测组分转化为有颜色的物质(或无颜色的物质)，利用颜色强度与待测组分浓度的相关性，采用数码相机或智能手机拍照、扫描仪扫描成图像，然后利用Photoshop等图像处理软件进行处理，根据图像颜色强度与待测物浓度间的关系进行定量分析。

因此，本发明设计制作了一种专用3DμPAD，通过选择相应的显色体系，建立了天然降压活性成分的新型快速筛选平台。以ACE为模型，马尿酰-甘氨酰-甘氨酸(HGG)为底物，通过纸芯片法对药物的半抑制浓度(IC50值)进行测定，对其抑制活性进行了评价。目前为止，本发明所用纸芯片及其筛选血管紧张素转化酶抑制剂方法尚未见相关报道。

发明内容

针对上述现有技术状况，本发明的目的首先提供一种专用于血管紧张素转化酶抑制剂筛选的纸芯片，本发明的另一个目的是提供一种用该纸芯片进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法。

现将本发明构思及技术解决方案叙述如下：