[发明专利]诱导间充质干细胞定向分化为神经细胞的方法及其培养基

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及血小板裂解物诱导间充质干细胞定向分化为神经细胞中的用途及诱导间充质干细胞定向分化为神经细胞的方法和产品。本发明发现了特定分子量的血小板裂解物与巴戟天寡糖组合在体外诱导间充质干细胞定向分化为神经细胞具有尚未被发现的特性，具体体现为，极显著地提高成熟神经细胞的分化率和增殖速度，且分化后的成熟神经细胞高表达nestin、GFAP、MAP2、NEFH神经细胞特异性基因。显示，具有明确且理想的诱导间充质干细胞定向分化为神经细胞的能力。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及诱导间充质干细胞定向分化为神经细胞的方法及其培养基。

背景技术

目前用于体外诱导MSCs分化为神经细胞的主要方法包括生长因子组合法和化学制剂法两种，其普遍存在细胞转分化率不高，成熟神经细胞比例低，分化细胞表型维持时间短，分化稳定性较差的问题。

血小板裂解物含有多种神经营养生长因子，如PDGF、BDNF、VEGF、TGE-β、bFGF和EGE等。bFGF能够通过与组织特异性受体结合，激活靶细胞内酪氨酸蛋白激酶而发挥作用，具有促进细胞增殖、分化、迁移等多种生物学效应；广泛参与血管生成、组织修复、肿瘤发生等生命过程。其作为重要的生长因子，目前在中枢神经系统中的功能逐渐受到重视，其对于神经组织的主要作用体现在神经发生、轴突生长、神经保护与再生等。目前有学者研究了血小板裂解物作为血清替代物对体外培养间充质干细胞的影响，结果显示，血小板裂解物培养间充质干细胞，基本能够代替血清的功能，可满足细胞长期的传代扩增所需，细胞形态稳定，细胞表型及成骨、成脂分化潜能保持稳定。

但血小板裂解物对间充质干细胞体外定向分化为神经细胞的影响未见研究，且血小板裂解物中含有的纤维蛋白原对神经突生长存在抑制作用，这些可能会影响血小板裂解物诱导间充质干细胞定向分化为神经细胞的能力，这也是目前未见将血小板裂解物用于诱导间充质干细胞分化为神经细胞的原因。

王力等研究发现巴戟天的醇提取物可以影响骨髓间充质干细胞在体外的增殖速率^[1]；黄有霖等研究发现，巴戟天的蒽醌苷类提取物在体外也能够明显促进骨髓间充质干细胞的增殖^[2]；凌昆等人在试验中发现，巴戟天的醇提取物能够显著刺激成骨细胞的增殖；巴戟天的正丁醇提取物可促进成骨细胞分泌碱性磷酸酶，还可促进转录生长因子β1的表达，从而分泌Ⅰ型胶原，促进钙盐沉积^[3]；李楠等人的研究发现，巴戟天多糖可以显著抑制成骨细胞的凋亡，其作用机制为通过影响Bcl-2基因和Bax基因的表达来发挥作用^[4]；朱孟勇等通过动物试验发现巴戟天多糖能够提高去势大鼠的骨密度，巴戟天多糖干预后大鼠骨质密度和骨矿物质明显高于模型组，并且剂量越高，效果越显著^[5]。这些研究都表明，某些特定浓度下的巴戟天多糖或巴戟天提取物具有在体外促进成骨细胞增殖的能力。但是未见研究巴戟天寡糖对间充质干细胞体外定向分化为神经细胞的影响。

[1]王力,王和鸣,李楠.巴戟天醇提物对骨髓基质细胞增殖影响的血清药理学试验方法的建立[J].江西中医学院学报,2004(06):39-41.

[2]黄有霖,郭素华,赵诣.闽产南靖巴戟天中促进骨髓基质细胞增殖成分的初步研究[J].海峡药学,2007(10):38-40.

[3]凌昆,赵诣,郭素华.巴戟天药物血清对成骨细胞生物学特性的影响[J].中华中医药杂志,2010,25(06):846-849.

[4]李楠,王和鸣,郭素华,林旭，郑良朴，王力.巴戟天多糖含药血清对体外培养成骨细胞凋亡的保护作用观察[J].中国骨伤,2008(01):39-41.

[5]朱孟勇,赫长胜,王彩娇.巴戟天多糖对骨质疏松大鼠骨密度及血清微量元素的影响[J].中草药,2010，41(09):1513-1515.

发明内容