[发明专利]一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法

说明书

本发明涉及靶点药物分析技术领域，且公开了一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，包括以下步骤：1)样品初步处理：将样品用酸解液或竞争抑制确认试剂以1:100倍来对样品进行酸处理后，然后将处理后的样品在室温下振荡孵育20‑40mi n得酸处理样品；2)样品温育：首先在抗菌板中加入Master M ix工作液90L/孔；其次在抗菌板中加入中和试剂20L/孔；然后在抗菌板中按照板图中样品顺序，单孔加入酸处理后的样品50L/孔。该新型检测l ag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，本技术建立了一种准确可靠的检测抗LAG3靶点单抗免疫原性的方法，该方法可以很好地解决内源性LAG3干扰对抗LAG3靶点单抗免疫原性检测的影响，从而准确获得免疫原性的数据。

技术领域

本发明涉及靶点药物分析技术领域，具体为一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法。

背景技术

在LAG3类药物抗药性抗体检测过程中，面临的1个主要挑战就是靶点分子(LAG3)的干扰，尽管给药前LAG3浓度不会显著影响ADA检测，但给药后，一方面由于药物迅速和血液中可溶性的LAG3结合，导致血液中游离的LAG3水平迅速降低，进而引发内在负反馈机制导致LAG3分泌增多；另一方面LAG3与药物结合导致清除显著减慢，从而导致总的LAG3水平显著升高，在ADA检测过程中需要采用酸解等方式将ADA-药物复合物解离开，形成游离的ADA以便于检测，但该过程的同时也会释放药物结合的LAG3分子，造成样品中的游离的LAG3水平显著升高，LAG3往往是以聚体的形式存在，可以直接与捕获试剂和检测试剂桥连而出现假阳性信号。

目前针对LAG3靶点抗体药物还没有解决方法，该类项目的免疫原性结果表现出较高的假阳性率，严重影响人们对现有结果的解读，无法为安全性及有效性评价提供数据支持，故而提出一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法来解决上述问题。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，具备获得免疫原性数据准确等优点，解决了无法提供安全且有效的数据支持的问题。

(二)技术方案

本发明提供一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，包括以下步骤：

1)样品初步处理：将样品用酸解液或竞争抑制确认试剂以1:100倍来对样品进行酸处理后，然后将处理后的样品在室温下振荡孵育20-40min得酸处理样品；

2)样品温育处理：首先在抗菌板中加入Master Mix工作液90L/孔；其次在抗菌板中加入中和试剂20L/孔；然后在抗菌板中按照板图中样品顺序，单孔加入酸处理后的样品50L/孔；最后封板在室温的环境下避光以540-640rpm的速率振荡温育2.0-2.5hr；

3)样品封闭处理：将封闭液加入MSD微孔板中150L/孔，封板后室温避光振荡封闭30-40min，并采用洗板液进行洗板；

4)样品加样处理：将抗菌板中样品按照板图转入MSD微孔板中50L/孔，封板后在室温避光的环境下以500-620rpm的速率振荡温育1.0-1.5hr，并采用洗板液进行洗板；

5)样品检测处理：将MSD Read BufferT(2x)工作液加入MSD微孔板中150μL/孔，15min内将MSD微孔板放入MESO QUICKPLEX SQ120中进行检测；

6)样品试验处理：将经灌胃或静脉注射的方式给予健康受试动物由步骤7)中所制备的溶液；

7)数据储存、分析：根据SOP-0447与SOP-0467储存原始数据，并打印；根据分析规程对原始数据进行分析并按照SOP-0447进行储存并打印。