[发明专利]一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒及其检测方法及应用

权利要求书

1.一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，包括：

纯化后的优势抗原表位OJ蛋白，所述纯化后的优势抗原表位OJ蛋白所对应的氨基酸序列SEQ NO.1所示。

2.如权利要求1所述的一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述纯化后的优势抗原表位OJ蛋白对应的全长蛋白结构如SEQ NO.2所示。

3.如权利要求1所述的一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述纯化后的优势抗原表位OJ蛋白由如SEQ NO.3、4所示的引物对扩增得来，所述引物对所对应的序列如下：

F:ccaccgccttgctgaca；

R:ccctgctcctagtagtaaaccttagaatc。

4.如权利要求1所述的一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA试剂盒中还包括：

至少一包被所述优势抗原表位OJ蛋白的96孔酶标板。

5.如权利要求1或4中任一项所述的一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA试剂盒中还包括：

阴性对照血清、阳性对照血清、血清稀释液、酶标二抗、洗涤液、底物显色液、终止液；

所述阴性对照血清为抗合成酶综合征患者免疫印迹法检测抗OJ抗体阴性血清；

所述阳性对照血清为抗合成酶综合征患者免疫印迹法检测抗OJ抗体阳性血清；

所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG。

6.如权利要求5所述的一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液为含0.5％BSA的PBS溶液。涤液为PBST，浓度为1％。底物显色液为四甲基联苯胺(TMB)；终止液为0.5％的稀硫酸溶液。

7.如权利要求1-6当中任一项所述的一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

利用所述96孔酶标板包被所述优势抗原表位OJ蛋白后在4℃的环境温度下包被过夜；

采用所述PBST洗涤液对多余的包被液进行去除，重复3-5次洗涤步骤；

在96孔酶标板的单孔中加入300ul，1％浓度的BSA溶液，在37℃下温育2小时后采用所述PBST进行洗涤，重复3-5次；

在96孔酶标板的单孔中加入100ul的所述阴性/阳性对照血清作为标准品和100ul的待测血清，常温温育1小时；

将温育后的残余溶液采用PBST洗涤液进行洗涤，重复3-5次洗涤步骤；

以1：60000的比例加入所述酶标二抗后常温温育30分钟；

将温育后的残余溶液采用PBST洗涤液进行洗涤，重复3-5次洗涤步骤；

加入所述底物显色液四甲基联苯胺(TMB)进行显色，显示完成后采用终止液终止反应；

在450/630nm酶标仪下读数。

8.如权利要求7所述的一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒的检测方法，其特征在于，所述阳性对照血清作为标准品的稀释及空白对照标准如下：

稀释梯度为：1：40，1：80，1：160，1：320，1：640，1：1280，1：2560；

空白对照采用100ul PH＝7.2的PBS缓冲液。

9.如权利要求7所述的一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒的检测方法，其特征在于，所述优势抗原表位OJ蛋白的浓度为5ug/ml，每个反应孔中加100ul。

10.如权利要求1-6当中任一项所述一种用于检测抗OJ抗体的ELISA试剂盒的应用，其特征在于，所述应用为用于抗OJ抗体检测。