[发明专利]一种高效诱导烟草种子愈伤组织的方法和培养基

说明书

本发明公开了一种高效诱导烟草种子愈伤组织的方法和培养基，所述方法包括：将成熟烟草种子的浸泡和消毒处理后，接种至愈伤诱导培养基进行光温诱导培养，获得出愈率高的愈伤组织；其中，所述愈伤诱导培养基以MS作为基础培养基且添加了2,4‑D和6‑BA：所述2,4‑D浓度为1.0mg/L时，6‑BA的浓度为0.1～2.0mg/L；或者所述6‑BA浓度为1.0mg/L时，2,4‑D的浓度为0.1～2.0mg/L。本发明打破传统的以离体叶片作为主要材料进行展开的烟草植物组织培养再生体系，能够快速便捷地从烟草种子中获得愈伤组织，并可用于遗传转化和丛生芽的培养等后续实验。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及一种高效诱导烟草种子愈伤组织的方法和培养基。

背景技术

烟草(Nicotiana tabacum L.)，茄科(Solanaceae)烟草属(Nicotiana)一年生草本植物，不仅是一种重要的经济作物，而且常常作为模式植物并在植物生命科学领域中发挥着重要的作用，具有很高的科学研究价值。

目前，通过组培的手段获得烟草愈伤组织的方法有很多，其中较为成熟也是较为常用的方法是离体叶片诱导法，即以烟草的离体叶片组织作为主要材料，在添加合适的激素配比后，诱导其脱分化从而得到愈伤组织。

但是，这种离体叶片诱导法存在着操作繁琐、污染率高、出现机械伤口易导致褐化等一系列不足之处。此外，离体叶片组织一般来自于对种子的无菌培养，前期花费的时间也较长。

因此，如何制备一种高效诱导烟草种子愈伤组织的方法，成为亟待解决的技术难题。

发明内容

本发明目的是提供一种高效诱导烟草种子愈伤组织的方法，打破传统的以离体叶片作为主要材料进行展开的烟草植物组织培养再生体系，提供一种全新、便捷、稳定的获得烟草愈伤组织的方法，为组培相关研究工作奠定基础。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

在本发明的第一方面，提供了一种高效诱导烟草种子愈伤组织的方法，所述方法包括：

将成熟烟草种子的浸泡和消毒处理后，接种至愈伤诱导培养基进行光温诱导培养，获得出愈率高的愈伤组织；其中，所述愈伤诱导培养基以MS作为基础培养基且添加了2,4-D和6-BA：

所述2,4-D浓度为1.0mg/L时，6-BA的浓度为0.1～2.0mg/L；

或者所述6-BA浓度为1.0mg/L时，2,4-D的浓度为0.1～2.0mg/L。

进一步地，所述2,4-D浓度为1.0mg/L时，6-BA的浓度为0.5～1.0mg/L。

进一步地，所述6-BA浓度为1.0mg/L时，2,4-D的浓度为0.5～1.5mg/L。

进一步地，所述光温诱导培养的条件为：光照周期14～16h/天，光照强度100μmolm^-2s^-2，培养温度为：25±1℃，培养时间为18～24天。

进一步地，所述成熟烟草种子的浸泡和消毒处理，包括：

将新鲜烟草成熟种子加水浸泡，后用无菌水漂洗、用84消毒液浸泡消毒，再用无菌水漂洗。

在本发明的第二方面，提供了一种高效诱导烟草种子愈伤组织的培养基，所述培养基为愈伤诱导培养基，所述愈伤诱导培养基以MS作为基础培养基且添加了2,4-D和6-BA：

所述2,4-D浓度为1.0mg/L时，6-BA的浓度为0.1～2.0mg/L；

或者所述6-BA浓度为1.0mg/L时，2,4-D的浓度为0.1～2.0mg/L。