[发明专利]一种纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗的制备方法在审
| 申请号： | 202210486953.8 | 申请日： | 2022-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN114854789A | 公开（公告）日： | 2022-08-05 |
| 发明（设计）人： | 翟秋明;胡小龙;张星;梁子;贡成良 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N15/38;C12N5/10;A61K39/245;A61K47/69;A61P31/20 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 孙周强;陶海锋 |
| 地址： | 215137 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 纳米 晶体 包裹 cyhv 核酸 单位 疫苗 制备 方法 | ||
1.一种纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗的制备方法，包括以下步骤，将重组病毒基因转染家蚕培养细胞，再培养至细胞发病，然后收集细胞培养上清，获重组病毒，再将重组病毒接种家蚕幼虫或家蚕培养细胞，通过收集感染家蚕的血淋巴或家蚕培养细胞，离心处理即可获得纳米晶体包裹的疫苗，为纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗；所述重组病毒基因含有CyHv-2核酸序列以及部分多角体基因序列。
2.根据权利要求1所述纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，培养的培养温度为26～27℃。
3.根据权利要求1所述纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，将重组病毒接种家蚕幼虫，发病后，收集家蚕血淋巴，通过离心纯化多角体，获纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗。
4.根据权利要求1所述纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，将重组病毒接种家蚕培养细胞，26～27℃培养3～6天，收集细胞，破碎细胞后通过离心获纯化的纳米晶体包裹的疫苗；离心的转速为14000～15000转/分钟，同时采用SDS缓冲液清洗。
5.根据权利要求1所述纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，接种家蚕幼虫或家蚕培养细胞的重组病毒为二代重组病毒。
6.根据权利要求5所述纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，将重组病毒基因转染家蚕培养细胞，再常规培养至细胞发病，然后收集细胞培养上清，获重组病毒，将所述重组病毒再次转染家蚕培养细胞，再常规培养至细胞发病，然后收集细胞培养上清，获二代重组病毒。
7.根据权利要求1所述纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，将SEQ ID NO:1序列、SEQ ID NO:2序列分别克隆入载体，得到重组质粒；将重组质粒转化感受态细胞，得到重组病毒基因，所述重组质粒含有CyHv-2核酸序列以及部分多角体基因序列。
8.根据权利要求1所述纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗的制备方法制备的纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗。
9.权利要求8所述纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗在制备异育银鲫鳃出血病免疫预防药物中的应用。
10.一种异育银鲫鳃出血病免疫预防药物，包括权利要求8所述纳米晶体包裹CyHv-2核酸亚单位疫苗。
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