[发明专利]同时检测浙麦冬中皂苷和黄酮含量的液相色谱方法

说明书

本发明公开了一种同时检测浙麦冬中皂苷和黄酮含量的液相色谱方法，包括以下步骤：1）分别取浙麦冬皂苷和黄酮对照品，制备混合标准品溶液，将所得的混合标准品溶液在HPLC‑DAD‑ELSD分析条件下进行检测，得到标准曲线；2）取待检的浙麦冬样品，制备供试品溶液，用HPLC‑DAD‑ELSD联用方法进行检测；3）计算浙麦冬样品中的皂苷和黄酮含量。本发明采用离子液体提取浙麦冬特征性成分，与传统有机溶剂提取相比，是一种更高效、更绿色的提取方法；建立的HPLC‑DAD‑ELSD检测方法具有快速、准确、重复性好等优点。

技术领域

本发明属于天然药化与中药的分析检测技术领域，具体涉及一种同时检测浙麦冬中皂苷和黄酮含量的液相色谱方法。

背景技术

浙麦冬是浙江省最为著名的道地药材“浙八味”之一，为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus(L.f.)ker-Gawl.的干燥块根，在急性咳嗽、喉咙肿痛和心脑血管等疾病的治疗中已有上千年的历史。由于浙麦冬在栽培条件、地域环境以及生长周期等方面与川麦冬存在的巨大差异，浙、川麦冬在化学成分组成以及含量上有所区别并各具特色。药理研究表明，浙麦冬提取物对H₂O₂诱导的心肌细胞损伤和脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞炎症有更强的抑制作用，而浙、川麦冬对不同的肿瘤细胞株表现出不同的选择细胞毒性。研究表明，甾体皂苷和高异黄酮类成分是其主要药效物质，我们研究结果进一步显示，慈溪麦冬皂苷B与慈溪麦冬皂苷C、甲基麦冬黄烷酮A与甲基麦冬黄烷酮B是浙麦冬中主要特征性的甾体皂苷和高异黄酮成分。由于目前浙麦冬与川麦冬存在成分差异，浙麦冬市场价格也远高于川麦冬，因此建立检测浙麦冬特征性成分检测方法对浙麦冬药材真伪鉴别及质量控制具有非常重要的意义。

目前已有文献报道，应用HPLC-MS、HPLC-UV-ELSD对浙川麦冬中不同成分的鉴定与指纹图谱分析，应用HPLC-UV、HPLC-ELSD、HPLC-MS分别测定麦冬部分特征性黄酮或皂苷。但是由于缺乏特征性成分对照品，皂苷检测灵敏度低等原因，探索建立一种简便、准确的同时定量分析浙麦冬中黄酮类和皂苷的方法十分必要。此外，目前浙麦冬成分分析检测的前处理中，主要采用甲醇等有机溶剂提取，存在提取选择性差、杂质较多，同时存在一定安全风险和环境污染等缺点。离子液体作为一类新的绿色溶剂，相比传统的有机溶剂具有蒸气压低、液程宽、热稳定性高、溶解能力好等优良特性；其结构具有可设计性，可通过改变或修饰对离子液体的物化性质进行调节以满足应用需要。近年来，离子液体阴、阳离子不同结构组合的独特优势逐渐在不同类别的天然活性物质的提取前处理中展现。此外，采用HPLC-DAD-ELSD联用技术是一种可以同时检测分析麦冬黄酮类与皂苷类成分的液相色谱方法，具有省时、简便的优点。

发明内容

本发明针对现有浙麦冬成分检测方法存在的不足，建立了一种基于离子液体提取及液相色谱分析浙麦冬特征性成分的分析检测方法。目的在于解决常规检测方法较少兼顾皂苷和黄酮成分，提取中使用有机溶剂存在安全污染的问题，建立一种更高效、更绿色的提取与同时检测浙麦冬中特征性皂苷和黄酮成分的方法。

本发明创新点在于首先选用合适的离子液体溶液超声辅助提取浙麦冬样品特征性成分，然后通过固相萃取法对浙麦冬特征性成分进一步的富集，最后采用HPLC-DAD-ELSD方法进行检测。

本发明的技术方案如下：

1)样品提取

首先将麦冬块根或须根药材粉末成细粉，准确称取浙麦冬样品粉末适量于具塞三角瓶中，加入离子液体溶液置于超声清洗仪中，超声提取若干分钟后离心，取清液过滤，取适量滤液吸附于固相萃取柱，依次用水、25％甲醇、100％甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液旋蒸浓缩，用甲醇准确定容至2ml，经微孔滤膜过滤，得到待测样品溶液。

所述的离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐、1-丁基-3-甲基咪唑三氟甲磺酸盐、1-丁基-3-甲基咪唑氯盐、1-丁基-3-甲基咪唑溴酸盐中的任一种，优选1-丁基-3-甲基咪唑三氟甲磺酸盐。