[发明专利]一种测定诃子中化学成分含量的方法

说明书

本申请提供了一种测定诃子中化学成分含量的方法，采用超高效液相色谱‑质谱联用，快速检测诃子中阿江榄仁酸、山楂酸、科罗索酸、诃子次酸、1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖、柯里拉京、鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、原儿茶酸、诃子鞣酸、槲皮素、诃子林鞣酸、芦丁的含量。本申请提供的方法操作简单、灵敏度高、分析速度快、专属性强，可以用于诃子的质量控制。

技术领域

本申请涉及中药成分测定技术领域，特别是涉及一种测定诃子中化学成分含量的方法。

背景技术

诃子为使君子科植物诃子Terminalia chebula Retz.或绒毛诃子Terminaliachebula Retz.var.tomentella Kurt.的干燥成熟果实，诃子性平，味苦、酸、涩，归肺、大肠经，功效涩肠止泻，敛肺止咳，降火利咽。主治久泻久痢，便血脱肛，肺虚喘咳，久嗽不止，咽痛音哑。诃子具有较大的药用价值，但是不同药材的质量参差不齐，难以对其质量进行评价。

诃子中化学成分丰富多样，其中，酚酸类、鞣质类、三萜类、黄酮类等化合物是诃子发挥药理活性的重要物质基础。目前，关于诃子的质量控制研究主要以鞣质类和酚酸类化合物作为指标性成分，对其他成分研究较少。关于诃子成分含量的测定方法有滴定法、比色法、薄层扫描法及高效液相色谱法，其中，滴定法主要用于测定诃子鞣质类化合物，但是选择性较差；比色法多用于测定诃子鞣质、酚酸类化合物；薄层扫描法用于测定没食子酸的含量，但是重现性差，受显色条件及制剂中的其他成分干扰较大；高效液相色谱法应用较多，但方法耗时长、灵敏度低。因此，需要一种高效、快速、高灵敏度的检测方法，测定诃子中化学成分的含量，为诃子的质量评价及药效物质基础的研究提供依据。

发明内容

本申请的目的在于提供一种测定诃子中化学成分含量的方法，以实现同时测定诃子中15种化学成分的含量，可用于诃子的质量控制。具体技术方案如下：

本申请提供了一种测定诃子中化学成分含量的方法，其特征在于，采用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)，测定诃子中化学成分的含量；所述化学成分包括阿江榄仁酸、山楂酸、科罗索酸、诃子次酸、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、柯里拉京、鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、原儿茶酸、诃子鞣酸、槲皮素、诃子林鞣酸、芦丁；所述方法包括：

(1)建立各化学成分的标准曲线；

以80-100vol％甲醇为溶剂，配制5-12个含有不同已知浓度的各化学成分的混合对照品溶液；其中，阿江榄仁酸浓度为1-800ng/mL；柯里拉京浓度为1-30000ng/mL；槲皮素浓度为0.4-400ng/mL；诃子次酸浓度为20-55000ng/mL；诃子鞣酸浓度为4-55000ng/mL；诃子林鞣酸浓度为10-30000ng/mL；科罗索酸浓度为0.1-800ng/mL；芦丁、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯浓度为0.2-800ng/mL；没食子酸浓度为10-30000ng/mL；鞣花酸浓度为5-30000ng/mL；山楂酸浓度为0.1-800ng/mL；1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖糖浓度为3-30000ng/mL；原儿茶酸浓度为2-8000ng/mL；

在相同的色谱条件和质谱条件下，将体积为V₁的各混合对照品溶液分别注入超高效液相色谱仪中，通过质谱检测，根据各化学成分的特征离子确定各化学成分的色谱峰，并获得各化学成分的色谱峰面积；

以各化学成分的色谱峰的峰面积为纵坐标，以各化学成分的浓度为横坐标，分别建立各化学成分的标准曲线；

(2)获得供试品溶液中各化学成分的色谱峰面积；

取质量为M的供试样品，以体积为V₂的60-80vol％甲醇为溶剂进行提取，取上清液过滤后得到供试品溶液，其中，M/V₂为(1-3):10mg/mL；