[发明专利]一种快速鉴定甲壳动物年龄的方法

说明书

本发明涉及一种快速鉴定甲壳动物年龄的方法，包括：切下甲壳动物眼柄，将眼球切半，取出眼柄内软组织后清理眼柄内残存有机物，之后将清洗后的眼柄置于容器中加水、冷冻保存；向模具内注入调配好的室温固化环氧冷镶埋树脂，硬化后形成底模备用；取出冷冻保存的眼柄，解冻后以水清洗眼柄内部，之后通过室温固化环氧冷镶埋树脂将眼柄固定在底模上，等待其硬化后备用；取出硬化后的树脂，固定好后切除并保留眼柄中部的树脂切片；将树脂切片两面打磨，直至显微镜下横截切面上能观察到清晰的生长纹；在显微镜下选取清晰的位置进行拍照读数。本发明能有效解决现有硬组织生长纹分析法采用的包埋方式存在制片成功率低、包埋程序复杂、耗费时间长的问题。

技术领域

本发明涉及年龄鉴定技术领域，具体涉及一种快速鉴定甲壳动物年龄的方法。

背景技术

甲壳类特有的蜕壳现象，使其能够记录年龄信息的外骨骼周期性消失，因此甲壳类的年龄鉴定一直未得到较好的解决。年龄鉴定是评估甲壳类渔业资源的基础，鉴定甲壳类年龄的方法主要有饲养法、标记重捕法、体长频度法、脂褐素分析法、放射性同位素分析法和硬组织生长纹分析法。其中，饲养法、标记重捕法和放射性同位素分析法较准确，然而由饲养法得到的数据不适应于实际野生环境，放射性同位素分析法花费较高，因此，这两种方法都存在较大的局限性。应用最广泛的标记重捕法和体长频度法也存在不足之处。相对于体长频度鉴龄技术而言，脂褐素分析法优势明显，但是对劳动强度和技术要求高，且鉴定出的为生理年龄而非绝对年龄。

硬组织生长纹分析法是近几年兴起、用于甲壳类鉴定年龄的新方法，其利用甲壳类眼柄或胃磨等硬组织在生产过程中产生的生长纹来鉴定年龄。但是发明人发现由于甲壳类外骨骼硬度高，导致硬组织石蜡包埋和冷冻液包埋需要经过复杂的前处理使硬组织软化，从而降低切片时硬组织的脱模率。而常规的树脂包埋在浇筑的过程中树脂溶液热度容易产生大量气泡，且造成样本化学性质的改变。即上述包埋方法使得已有的硬组织生长纹分析法存在制片成功率低、包埋程序复杂、耗费时间长的问题。因此，亟需设计一种新的技术方案，以综合解决现有技术中存在的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速鉴定甲壳动物年龄的方法，能有效解决现有硬组织生长纹分析法采用的包埋方式存在制片成功率低、包埋程序复杂、耗费时间长的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用了以下技术方案：

一种快速鉴定甲壳动物年龄的方法，包括以下步骤：

S1.取样；切下甲壳动物眼柄，将眼球切半，取出眼柄内软组织后清理眼柄内残存有机物，之后将清洗后的眼柄置于容器中加水、-20℃～-4℃冷冻保存；

S2.准备模具；向模具内注入调配好的室温固化环氧冷镶埋树脂，硬化后形成底模备用；其中室温固化环氧冷镶埋树脂为树脂胶和固化剂混合调配而成的；

S3.包埋；取出冷冻保存的眼柄，解冻后以水清洗眼柄内部，之后将眼柄平滑面向下水平放置于硬化完成的底模上，再次注入室温固化环氧冷镶埋树脂至眼柄内外被室温固化环氧冷镶埋树脂溶液包裹满且无气泡，之后等待其硬化；

由于眼柄是近似的圆柱体，在无固定的树脂溶液中，即使树脂稠度较高，在静置硬化中眼柄也会因为自身重力的作用发生歪斜，而直接将眼柄水平放入模具注模，硬化后眼柄有一部分接近边缘甚至没有树脂包被，在打磨过程中眼柄极易掉出。因此本发明选用在模具中先用树脂注成并硬化为一个树脂底膜，再将眼柄平滑面向下水平放置在底模上再次注模。

S4.切片；取出硬化后包含眼柄的树脂，固定好后切除眼柄远端，并保留眼柄中部的树脂切片；

S5.打磨；将树脂切片两面打磨，直至显微镜下横截切面上能观察到清晰的生长纹；

S6.年龄读取；将打磨好的树脂切片置于显微镜下选取清晰的位置进行拍照读数。