[发明专利]一株防治烟草炭疽病的枯草芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明提供了一株防治烟草炭疽病的枯草芽孢杆菌及其应用，属于微生物技术和烟草病害防治技术领域。所述枯草芽孢杆菌命名为K11，已于2021年3月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2021284。将该枯草芽孢杆菌K11制备的菌剂用于烟草炭疽病的防治技术中，能减少至少52.8％的化学农药用量；在烟草移栽后75d，本发明对烟草炭疽病的防治效果较常规防控措施提高至少50.00％；烟草移栽后100d，本发明对烟草炭疽病的防治效果较常规防控措施提高至少59.49％。

技术领域

本发明属于微生物技术和烟草病害防治技术领域，具体涉及一株防治烟草炭疽病的 枯草芽孢杆菌及其应用。

背景技术

烟草炭疽病是由炭疽菌(Colletotrichum spp.)侵染引起的一种真菌性叶部病害。该 病在烟草整个苗期和大田生长期均可发生。近年来，烟草炭疽病在烟叶大田生长期的为 害逐渐加重。发病初期，烟叶会出现暗绿色、水渍状的小斑点，后逐渐扩大成圆形或椭圆形病斑。天气干燥时，圆形病斑中央部分为灰白色，有黄褐色或者褐色的边缘，发病 后期病斑处叶片会破碎，甚至造成穿孔；天气潮湿时，病斑上会产生小黑点。炭疽菌在 合适的条件下传播速度快、繁殖速率高，烟株脚叶一般先发病，而后逐渐向上方叶片蔓 延，发病严重时毁掉整片烟田，如若病情防治工作不及时还会造成病害大流行，给烟叶 生产带来巨大的经济损失。因此，对烟草炭疽病的防治迫在眉睫。

目前，炭疽病害的防治方法主要以化学农药为主，但长期使用化学农药，易使病菌产生抗药性，危害更加严重；同时也会造成烟叶农药残留的增加和污染环境等问题。芽 孢杆菌具有防病促生的作用，拥有适应能力强及稳定性强、在占领空间及生存竞争方面 占绝对优势，同时具有对人畜低毒且绿色环保的优点，受到微生物制剂研究工作者的重 视。但是目前已开发出的用于烟草炭疽病防治的芽孢杆菌非常少，研究技术还不成熟， 使得生物防治烟草炭疽病的技术可选择范围小，推广难度大，因此，有必要开发出更多 的适合烟草炭疽病防治的生防菌株。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一株能够用于防治烟草炭疽病的枯草芽孢杆菌；第二个 目的是将所述枯草芽孢杆菌制备成用于防治烟草炭疽病的菌剂；第三个目的是提供所述 菌剂应用于烟草炭疽病防治的方法。

为了达到上述第一个目的，本发明提供一株防治烟草炭疽病的枯草芽孢杆菌，所述 枯草芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M 2021284。

本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus sp.)命名为K11，是从烟草炭疽病发病烟田(湖北省恩施州宣恩县椒园镇锣圈岩村烟田)中取健康烟株根际土，采用稀释涂布的方法将 土壤微生物悬液涂布于NA培养基上进行细菌的分离和纯化，以烟草炭疽病病原菌为靶 标，通过平板试验进行筛选，得到对烟草炭疽病具有较好防治效果的菌株。该菌株已于 2021年3月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国，武汉，武汉大学)， 保藏编号为：CCTCCNO：M 2021284。

为了达到上述第二个目的，本发明提供一种防治烟草炭疽病的菌剂，所述菌剂由上 述保藏编号为CCTCC NO：M 2021284的枯草芽孢杆菌K11制备而成。

所述菌剂的制备方法包括以下步骤：

S1、将所述防治烟草炭疽病的枯草芽孢杆菌在LB固体平板培养基上活化；

S2、从步骤S1所述LB固体平板培养基上挑取单菌落接种到LB液体培养基中进 行培养得种子液；

S3、以2v/v％～3v/v％的接种量将种子液接种到发酵培养基中进行培养得发酵液， 调节发酵液中菌液浓度至所需范围即得所述防治烟草炭疽病的菌剂。

优选的，所述LB固体平板培养基的成分包括：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/L NaCl，15g/L琼脂粉，pH为7.2。