[发明专利]一种对可溶性CD25蛋白含量检测的酶联免疫检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测分析可溶性CD25蛋白含量的酶联免疫试剂盒，试剂盒包括CD25‑5G1和CD25‑2D2两种抗人CD25单克隆抗体：所述的CD25‑5G1单克隆抗体，包括重链和轻链，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：1；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：2；所述的CD25‑2D2单克隆抗体，包括重链和轻链，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：4。本发明的酶联免疫试剂盒能够有效检测可溶性CD25含量。利用该试剂盒检测发现，健康人血清中含有一定基础水平的可溶性CD25蛋白，类风湿关节炎患者、Graves病患者、I型糖尿病患者血清可溶性CD25含量明显升高，与患者的临床分期、身抗体产生及疗效有相关性。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种对可溶性CD25蛋白含量进行定量分析的酶联免疫检测试剂盒，该试剂盒可用于自身免疫性疾病患者体液可溶性CD25蛋白含量检测；从而用于自身免疫性疾病鉴别诊断和预后判断。

背景技术

白介素2(IL-2)是一种重要的调控免疫系统细胞增殖和分化的细胞因子，通过与细胞表面白介素-2受体(IL-2R)结合，继而激活胞质内多种非受体型蛋白质酪氨酸激酶(PTK),进一步启动Jak-STAT途径、Ras-MAPK途径以及PI3K途径，促进T细胞发生、发育、分化；在抗原抗体反应、感染性疾病和肿瘤等疾病致病中起着重要的作用。

白细胞介素2受体有三种多肽亚单位，包括CD25(IL-2Rα)、CD122(IL-2Rβ)和CD132(常见的γ链)。CD25即白介素2(interleukin 2，IL-2)异源三聚体受体复合物的α链，主要表达于CD4⁺T细胞膜表面，参与调节性CD4⁺T细胞在IL-2的生理低水平下进行分化和增殖。sCD25是膜结合形式IL-2受体α亚单位的裂解物，可与膜结合IL-2受体竞争性结合IL-2，是一种免疫抑制物。研究表明，sCD25是体现机体淋巴细胞活性的重要物质，在肾病综合征、病毒感染、肿瘤等疾病患者外周血及组织中高水平表达，且与患者的临床分期、预后等密切相关。健康人血清中含有一定基础水平的可溶性CD25蛋白(～500pg/ml)，而类风湿关节炎、Greves病患者、I型糖尿病患者血清可溶性CD25含量明显升高。且可溶性CD25蛋白含量与患者的临床分期、自身抗体产生和疗效有相关性。对自身免疫性疾病患者体液中可溶性CD25含量检测具有临床价值。

发明内容

本发明在筛选获得两种抗人CD25单克隆抗体的基础上，使用筛选获得的新的单克隆抗体来制备能够对可溶性CD25蛋白含量进行检测的酶联免疫检测试剂盒。

本发明首先提供两种抗人CD25蛋白的单克隆抗体，为CD25-5G1和CD25-2D2两种抗人CD25单克隆抗体；

所述的CD25-5G1单克隆抗体，包括重链和轻链，其重链可变区(mVH)的氨基酸序列如下：

EVHVKQSGAELAKPGASVKMSCKASGYNFTRHWIHWVKQRPGQGLEWIGYINPRTDYTEYNQKFKDKATLTADKSSSTAHMQLNSLTSEDSAVYYCARGNYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：1)；

CD25-5G1的轻链可变区(mVL)的氨基酸序列如下：

DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNTEQEDIATYFCQQGNTLPPTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO：2)；

所述的CD25-2D2单克隆抗体，包括重链和轻链，所述CD25-2D2的重链可变区(mVH)的氨基酸序列如下：