[发明专利]一种肿瘤干细胞向神经元方向分化方法

说明书

本发明提供了一种肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，该方法包括肿瘤干细胞获取，肿瘤干细胞向神经元诱导分化，分化后神经元的培养等；本发明并对分化后的神经元进行了一定的验证工作，证实了肿瘤干来源的神经元具备神经元的特异性标志物，并通过膜片钳验证了肿瘤干来源的神经元具有钠离子内流信号。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，尤其是涉及一种肿瘤干细胞向神经元方向分化方法。

背景技术

肿瘤干细胞（CSCs）是一种具有类似于体细胞干细胞能力的癌细胞亚群。CSCs在肿瘤的发生、转移、复发和耐药过程中起着关键作用。绝大部分的肿瘤被认为起源于CSCs，这可能是导致肿瘤临床治疗原发性和获得性耐药的重要原因之一，因此，近年来对于肿瘤干细胞的研究吸引了国内外肿瘤基础科研的广泛关注。目前已知有少数几种人类肿瘤，可自发性地从未分化的恶性肿瘤退变为完全良性肿瘤，而神经母细胞瘤细胞分化为神经元细胞就属于其中之一。

随着干细胞与再生医学技术的不断发展，干细胞这一具有无限自我更新复制以及分化再生能力的原始细胞群体，在组织的修复与再生方面展现出了巨大的潜力。因此，很多科研人员开始致力于利用干细胞对退行性神经系统进行修复。而经过科研人员数年的探索，截止到目前为止，干细胞干预神经退行性疾病领域，已相继取得突破，为神经退行性疾病患者带来了新的希望。目前修复神经元的干细胞主要起源于神经干细胞，由于神经干细胞来源及获得比较困难，所以制约着神经再生的研究进展。因此，CSCs的定向分化不仅是一种潜在的癌症治疗策略，而且为神经再生修复提供了一种新的思路。

目前肿瘤干主要从肿瘤组织及肿瘤细胞系中获得，由于从临床来源的肿瘤组织获得有限，且部分肿瘤组织需要进行临床病理分析，用来分离肿瘤干的大部分肿瘤组织以癌旁组织为主，这也制约着肿瘤干细胞的获取。由于以上原因，越来越多的研究者聚焦在从肿瘤细胞系中分离肿瘤干细胞。

在肿瘤干细胞向神经细胞分化的研究中，大部分研究参照神经干细胞向神经元诱导方法为主，其方法为培养过程中去除血清并加入神经营养因子及ATRA诱导剂为主，此方法促使肿瘤干细胞向神经元分化的能力及效率偏低，且分化后的神经细胞功能有待进一步提高。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，通过新的诱导方法，使肿瘤干细胞能够快速向神经元分化，分化后的神经元具备神经元特异性标志物，并具备钠电流信号。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，该方法包括如下步骤：

S1、肿瘤干细胞获取；

S2、肿瘤干细胞向神经元诱导分化；

S21、将肿瘤干细胞接种在分化培养基中培养3-7天，中间每2天换液1次，其中分化培养基为包含FBS、MEM-100x、青链霉素100x、全反式维甲酸ATRA和姜黄素的DMEM/F12完全培养基；

S22、将分化后的细胞导入神经元维持培养基中继续培养7-14天，神经元维持培养基为包含BDNF、NGF、MEM-100x、青链霉素100x和B27的Neurobasal Medium A完全培养基。

进一步，分化培养基中FBS的体积分数为1%-8%，MEM-100x的体积分数为0.5%-2%，青链霉素100x的体积分数为0.1-0.4%，ATRA的用量为每升1μM-10μM，姜黄素的用量为每升0.5μM-5μM。

进一步，每100mL分化培养基中FBS的用量为5mL，MEM-100x的用量为1mL，青链霉素100x的用量为200µL，ATRA的用量为1µM，姜黄素的用量为0.5µM。