[发明专利]一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法

说明书

本发明公开了一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法，包括以下步骤：收集越冬池中中国对虾亲虾粪便进行WSSV检测，淘汰检测结果为阳性的越冬池中的亲虾；对选留的亲虾进行单个检测，淘汰检测结果为阳性的个体；选留亲虾产卵孵化后对育苗池的仔虾进行抽样混合检测，淘汰阳性仔虾；将检测结果为阴性的仔虾个体放于室外养殖池的围格中进行养殖；收获时对每个围格养殖个体进行抽样混合检测，选留检测结果为阴性的围格内交尾雌虾进行越冬，作为第二年苗种繁育的亲虾。采用上述净化方案对中国对虾核心育种群进行连续多代的净化，可显著降低WSSV传播的风险，提高中国对虾的养殖成功率和产品质量安全。

技术领域

本发明属于中国对虾育种技术领域，具体涉及一种中国对虾核心育种群 WSSV的净化方法。

背景技术

中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)又称东方对虾、中国明对虾，是我国近海地方性特有种。中国对虾肉质鲜嫩味美，营养价值高，一直是我国江苏、山东、河北和辽宁等沿海地区的重要养殖物种，在养殖发展盛期(1990年前后)养殖产量达20万吨左右，占我国对虾养殖产量的70％。1993年由于大规模白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的爆发，中国对虾的养殖产量急剧下降，年产量长期徘徊在5万吨左右，经济损失惨重。

WSSV具有宿主范围广泛、感染能力强和致死率高等特点，中国对虾感染 WSSV后，3-10天死亡率可达100％，其传播方式既可以在养殖水体中进行水平传播也可以有亲代向子代垂直传播。为了降低WSSV对水产养殖业造成的损失，科研工作者对WSSV的基因组、与宿主互作的机制、检测方法的改进及防治等方面开展了大量的研究，但目前还没有有效预防疫苗和治疗药物。因此，对中国对虾核心育种群采取净化措施，加强亲虾和苗种的检测，从源头上减少虾苗带毒的概率，对于保障我国中国对虾种质资源质量，防止WSSV传播和流行具有重要意义。

水产种业是水产养殖业的基础和源头，如果对核心育种群的种苗携带病原势必会使整个养殖业面临严重的疫病风险。

发明内容

本发明提供了一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法，该方法在中国对虾良种选育的基础上，重点针对对中国对虾养殖业危害最严重的白斑综合征病毒(WSSV)，通过对亲虾、苗种以及养殖过程中WSSV的全面监测和持续净化，综合降低中国对虾核心育种群中WSSV传播的风险，推动中国对虾疾病防控从有效控制到逐步净化消灭的转变，提高中国对虾的养殖成功率和产品质量安全。

本发明提供了一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法，包括以下操作步骤：

(1)收集越冬池中国对虾已交尾雌虾(亲虾)粪便，套式PCR检测法对亲虾粪便进行WSSV检测，淘汰检测结果为阳性的越冬池中的亲虾；每个越冬池的亲虾数量控制在200尾左右，分别在早、中、晚三个时间点收集亲虾粪便3 份分别放入灭菌的1.5mL的离心管中，连续收集3天。每尾亲虾的价格很高，每个越冬池控制数量在200尾，如果检测粪便为阳性，则将该越冬池的亲虾淘汰，不至于造成太大的经济损失；另外通过连续3天采集粪便进行取样，几乎能保证大部分亲虾都能取样到，而且不会造成检测负担。

(2)对选留的亲虾进行单个检测，淘汰检测结果为阳性的个体；这一步骤保证了每一尾选留的亲虾都不携带WSSV，同时由于核心育种群数量控制在 1000尾左右，因此即使每尾亲虾都检测也不会有太大的工作量；如果没有步骤 (1)的筛选，此步骤的检测工作量会很大，在实际生产中，越冬亲虾的阳性率高达50％以上，因此如果想要筛选出1000尾不携带WSSV的亲本，则至少检测2000尾以上的亲虾。

(3)选留的亲虾进行产卵和孵化，待幼体发育至放苗规格时(体长约1.0cm) 对每个育苗池的仔虾进行抽样混合检测，淘汰阳性仔虾；