[发明专利]液相色谱-高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法

说明书

本发明公开了液相色谱‑高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法，所述氯丙醇酯包括两种缩水甘油酯、两种氯丙醇单酯和三种氯丙醇双酯；所述方法采用两级提取法，第一级采用甲醇振荡提取、C18固相萃取柱净化，完成对缩水甘油酯和部分氯丙醇单酯的提取和净化工作，第二级采用二氯甲烷、甲醇体积比8:2的混合溶剂提取，中性氧化铝粉净化，去除油脂干扰的同时，可完成对氯丙醇双酯的提取与净化，合并第一、二级提取液，用高效液相色谱‑高分辨质谱联用仪检测，采用外标法定量，即可实现对奶粉中氯丙醇酯的高通量筛查，方法检出限为0.02mg/kg，定量限为0.05mg/kg，回收率≥80.6％，标准偏差低于10％，该方法对高蛋白、高脂肪的奶粉基质具有较强的适用性。

技术领域

本发明涉及液相色谱-高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法。

背景技术

氯丙醇酯，是近年来发现的存在于婴幼儿配方奶粉中的一类新型污染物，其水解产物氯丙醇被证实具有致癌性、遗传毒性、肾脏毒性等。目前，食品中氯丙醇酯的检测对象主要集中在食用油中，常见的前处理技术包括：固相萃取、基质分散固相萃取、直接溶剂萃取、超声辅助提取等，主要目标是在保证氯丙醇酯类化合物高提取率的前提下，有效去除食用油中存在的高含量油脂—甘油三酯等非极性化合物的干扰，此类化合物在后续质谱分析中会产生强烈的离子化抑制效应，导致本就低含量的氯丙醇酯含量测定结果产生偏差或者未能检出，目前对于食用油中氯丙醇酯的研究己经在测定方法、形成机理、毒性研究及控制方法等方面取得了一定的进展。

但目前，关于婴幼儿配方奶粉中氯丙醇酯的相关研究还不够深入，尤其是针对复杂奶粉基质中目标化合物的提取净化方法尚未见报道。奶粉基质种类众多，成分复杂，除了添加量为20％左右的油脂外，其他添加的营养类化合物种类极其丰富，除此之外，一些有毒有害的化合物也会在奶粉中存在，包括：微生物、真菌毒素-黄曲霉毒素以及奶粉基质中残留的农兽药等。因此，建立全面高效的前处理方法，是保证获取全面氯丙醇酯结构信息的重要前提。如何通过一次前处理，实现婴幼儿奶粉中氯丙醇酯的提取、净化工作，这是一个巨大的挑战。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种利用液相色谱-高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法。

本发明采用的技术方案是：

液相色谱-高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法，所述氯丙醇酯为缩水甘油-棕榈酸酯、缩水甘油-硬脂酸酯、3-氯丙醇-2-硬脂酸单酯、3-氯丙醇-1-棕榈酸单酯、3-氯丙醇-1,2-棕榈酸二酯、2-氯丙醇-1,3-硬脂酸二酯、3-氯丙醇-1-棕榈酸-2-硬脂酸二酯中的一种或多种；所述方法包括以下步骤：

(A)样品前处理

(1)从奶粉样品中提取脂肪样品，脂肪样品用甲醇提取，离心，得到有机相A及残渣A；

(2)取步骤(1)的有机相A经C18固相萃取柱净化，甲醇淋洗，二氯甲烷和甲醇的体积比8:2的混合溶剂作为洗脱剂进行洗脱，所得洗脱液经氮吹浓缩近干，加入甲醇溶液复溶；

(3)取步骤(1)的残渣A加入二氯甲烷和甲醇的体积比8:2的混合溶剂进行二次提取，离心，得到有机相B及残渣B；

(4)取步骤(3)的有机相B，氮吹浓缩近干，加入甲醇溶液复溶，加入中性氧化铝粉充分震荡后离心，得到上清液C及沉淀C；

(5)合并步骤(2)的甲醇溶液和步骤(4)的上清液C，氮吹浓缩，甲醇定容至2.0mL，滤膜过滤，得到供试品溶液；

(B)高效液相色谱-高分辨质谱检测

供试品溶液用高效液相色谱-高分辨质谱联用仪检测，采用外标法定量，得到奶粉中7种氯丙醇酯含量。

所述步骤(1)中，所述从奶粉样品中提取脂肪样品，按照GB 5009.6-2016《食品中脂肪的测定》中的方法三中的步骤17.1.2、步骤17.2、步骤17.3进行。