[发明专利]原发性中枢神经系统淋巴瘤原代细胞的培养方法及专用培养基

说明书

本发明公开了原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)原代细胞的培养方法及专用培养基。所述专用培养基的成分包括：DMEM/F12，神经基础培养基，N2添加剂，B27添加剂，2‑巯基乙醇，人胰岛素，谷氨酰胺，丙酮酸钠，最低基本培养基，表皮细胞生长因子，碱性成纤维细胞生长因子和青霉素‑链霉素。本发明进一步公开了采用该专用培养基获得PCNSL原代细胞的培养方法。采用本发明的PCNSL原代细胞的专用培养基及其培养方法能够得到PCNSL的原代细胞，可用于PCNSL发生发展的机制研究和抗肿瘤药物筛选，同时为后续培养PCNSL细胞系奠定了基础。

技术领域

本发明涉及肿瘤原代细胞的培养方法，尤其涉及原发性中枢神经系统淋巴瘤原代细胞的培养方法及专用培养基，属于原发性中枢神经系统淋巴瘤原代细胞的体外培养领域。

背景技术

原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)是一种罕见且具有侵袭性的结外非霍奇金淋巴瘤，其发病率占中枢神经系统肿瘤的4％，占结外淋巴瘤的4％-6％。PCNSL病程短，进展快，预后差，具有高度致死性，5年和10年生存率分别为37.6％和29.7％。PCNSL的最佳治疗方案尚未确定，基于高剂量甲氨蝶呤的联合治疗是目前PCNSL的一线治疗方案。尽管一线治疗有较高的缓解率，但仍有50％患者会复发，10-15％的患者为原发耐药，属结外淋巴瘤中预后很差的类型，因此临床亟需新的治疗药物优化一线治疗方案。通过体外培养病人来源的PCNSL细胞，构建PCNSL疾病模型进行临床前药物筛选迫在眉睫。

鉴于PCNSL是一种罕见肿瘤，目前仍然没有原代细胞培养方法的相关报道且无成熟的细胞系，体外PCNSL发生发展的机制研究以及抗肿瘤药物筛选均受到了很大限制。早期PCNSL的基础研究是基于体部非霍奇金淋巴瘤细胞系的异种移植模型，并不能真实还原PCNSL发生发展的历程。随着病人来源的异种移植模型(PDX)技术的发展和进步，近年来PCNSL的基础研究是基于病人来源的PCNSL异种移植模型。虽然PDX技术能很好的应用于抗肿瘤药物筛选，但构建PDX模型周期长，成本高，成功率低。同时，基于手术切除对PCNSL患者无明显生存获益且存在神经损伤后遗症，针对中枢神经系统肿瘤，美国国立综合癌症网络(NCCN)指南不推荐手术切除，导致PCNSL大块组织难以获得，PDX模型构建更加困难。因此，亟需一种容易构建PCNSL疾病模型的方法。

通过特制的培养基体外培养病人来源的PCNSL组织，获得PCNSL原代细胞，建立体外PCNSL疾病模型，可以从细胞分子角度去深入研究疾病发生发展的机制，并且可以有针对性的利用此类细胞进行临床前药物筛选及药效评估。相比于PDX模型，该培养方法培养周期更短，成本更低，技术上更容易实施和普及。

发明内容

本发明的目的之一是提供用于原发性中枢神经系统淋巴瘤原代细胞的专用培养基；

本发明的目的之二是提供原发性中枢神经系统淋巴瘤原代细胞的培养方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明一方面提供了用于原发性中枢神经系统淋巴瘤原代细胞的专用培养基(PCNSL培养基)，所述专用培养基的成分包括：DMEM/F12，神经基础培养基(Neurobasalmedium)，N2添加剂(N2 supplement)，B27添加剂(B27 supplement)，2-巯基乙醇(2-mercaptoethanol)，人胰岛素(Human insulin)，谷氨酰胺(Glutamax)，丙酮酸钠(Sodiumpyruvate)，最低基本培养基(MEM)，表皮细胞生长因子(EGF)，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，青霉素-链霉素(Penicillin-Streptomycin)。

优选的，每50ml的专用培养基中，各成分的体积或其终浓度为：

2-Mercaptoethanol其终浓度为3.5ul/L；