[发明专利]一种大批量磁珠分选细胞的方法

说明书

本发明公开了一种大批量磁珠分选细胞的方法。是将细胞和“抗体标记的微磁珠”直接放在培养皿中混匀结合，结合结束后在培养皿下面放磁铁，再将洗液加入平皿内，吹打细胞悬液，再吸弃含有没结合在免疫磁珠上的细胞的悬液，如此重复若干次，最后撤出磁铁，由此获得纯化的细胞。1、效率高。细胞与磁珠在培养皿中结合，底面积大，结合效率高。2、操作时间短。细胞一直在培养皿中，节省了转移细胞的时间。3、直观可视。显微镜下可视：在磁场的作用下磁珠带动细胞。4、成本低。一块磁铁是唯一需要的“设备”。

技术领域

本发明属于生物医学实验技术领域，具体涉及一种大批量、快速进行磁珠分选细胞的方法和应用。

背景技术

目前进行细胞分选最常用的方法是免疫磁珠分选法，其是将细胞表面抗原特异性的抗体结合在超级顺磁性的微磁珠上，通过磁珠再特异性地结合细胞；然后把这些结合着细胞的微磁珠放在强而稳定磁场中的分选柱中，被结合着细胞的磁珠会滞留在柱里而未结合的细胞则可以被洗脱流出；当分选柱移出磁场后，滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来；由于抗体的特异性，从而将某一类细胞分选出来。具体方法是：细胞和“抗体标记的微磁珠”结合过程在离心管中进行，约为30分钟。结合过程结束后再把离心管放在具有磁性的分选柱中，然后清洗弃除没有结合的细胞，清洗后再取出离心管，加培养基洗脱出分选出的细胞。整个过程约需要60分钟，耗时又耗力。

发明内容

本发明的目的是提供一种效率高、操作时间短、成本低的大批量磁珠分选细胞的方法。

本发明的大批量磁珠分选细胞的方法，其是将细胞和“抗体标记的微磁珠”直接放在培养皿中混匀结合，结合过程结束后在培养皿下面放磁铁，再将洗液加入平皿内，吹打细胞悬液，再吸弃含有没结合在免疫磁珠上的细胞的悬液，如此重复若干次，最后撤出磁铁，由此获得纯化的细胞。

优选，所述的若干次为3次。

优选，所述的将细胞和“抗体标记的微磁珠”直接放在培养皿中混匀结合，其是在37℃结合5min。

优选，纯化的细胞可以直接加培养基在同一培养皿中培养。

本发明的有益效果如下：

1、效率高。细胞与磁珠在培养皿中结合，底面积大，结合效率高。

2、操作时间短。细胞一直在培养皿中，节省了转移细胞的时间。

3、直观可视。显微镜下可视：在磁场的作用下磁珠带动细胞。

4、成本低。一块磁铁是唯一需要的“设备”。

附图说明：

图1是本发明的技术方案示意图；

图2是磁珠分选的肺组织血管内皮细胞实例。A:分选后贴壁的细胞。可见结合的磁珠(细胞体内圆形发亮的小体)，细胞开始伸展出突起。B:CD31抗体鉴定血管内皮细胞(共聚焦显微镜下)阳性率达到98％以上。免疫荧光染色显示绝大部分细胞CD31抗体染色阳性(绿色)。DAPI(蓝色)为细胞核染色，显示所有细胞。。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1血管内皮细胞的分选

如图1所示，将经过酶消化分离的原代小鼠肺细胞悬液(包含有所有肺组织的细胞)移入直径6cm的平皿内，每个平皿加入8ml内皮细胞培养基(ECM，sciencecell公司)；将预先处理好的以1:40浓度结合了CD31抗体的免疫磁珠((Miltenyi Biotec)加入细胞悬液中，将培养皿放入4℃中，每2分钟轻轻摇晃培养皿，使血管内皮细胞与磁珠充分结合；5分钟后将培养皿放入一强磁铁上面，在强大的磁场作用下，与磁珠结合的血管内皮细胞将很快沉降到培养皿底部；用枪头吸取上清液弃之，此时培养皿底部的细胞即为血管内皮细胞。该细胞常规培养后经过免疫组化鉴定，阳性率达98％以上(见附图2)。