[发明专利]适应vero细胞的肠道病毒D68、肠道病毒D68疫苗及其用途

说明书

本发明提供了适应vero细胞的肠道病毒D68、肠道病毒D68疫苗及其用途，其中包含适应vero细胞的肠道病毒D68的疫苗，在适应之前在基本上不含血清的培养基中培养所述vero细胞。本发明还公开了在受试者中诱导针对肠道病毒D68感染的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者给药有效量的所述疫苗。

技术领域

本发明涉及肠道病毒技术领域，具体而言，涉及适应vero细胞的肠道病毒D68、肠道病毒D68疫苗及其用途。

背景技术

肠道病毒D68(EV-D68)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属的单链正义RNA病毒。EV-D68于1962年于加利福尼亚首次分离自四例肺炎及细支气管炎的住院儿科患者，并且其直到2000年代早期为止仍为罕见报导的感染(M.Vogt等人，Current Understanding ofHumoral Immunity to Enterovirus D68,JPIDS 2018:7(增刊2)s49-s53)。此后，EV-D68已经因在全球爆发而被认为是日益重要的病原体。越来越多的证据表明，它可引起急性弛缓性脊髓炎(AFM)，一种脊髓灰质炎样神经肌肉无力综合征)的爆发，与EV-D68呼吸系统疾病爆发同时发生。

EV-D68的治疗主要是支持性护理，因为没有许可的疫苗或治疗药物来预防或治疗EV-D68感染或AFM疾病。

Vero细胞系是监管机构(例如世界卫生组织)最广泛认可的用于生产人用病毒疫苗的连续细胞系之一。然而，W.Wei等人(ICAM-5/Telencephalin Is a Functional EntryReceptor for Enterovirus D68,Cell Host Microbe.2016年11月9日；20(5):631-641)和J Sun等人(Current Understanding of Human Enterovirus D68,Viruses 2019,11(6),490)进行的研究报告，vero细胞不允许EV-D68感染，除非ICAM5在EV-D68不允许的vero细胞中外源性表达。动物血清(诸如牛血清白蛋白)用于病毒培养和疫苗生产的用途具有许多缺点，包括暴露于不利因素，诸如内毒素、支原体、病毒污染物或FBS中的朊病毒蛋白(G.Gstranthuler等人，A plea to reduce or replace fetal bovine serum in cellculture media,cytotechnology.2013年10月；65(5):791-793)并且可能引起疫苗超敏反应，尤其是对牛肉或牛乳过敏的超敏反应(R.de Silva等人，Sensitization to bovineserum albumin as a possible cause of allergic reactions to vaccines,Vaccine，2017年3月13日；35(11):1494-1500)。

对EV-D68感染进行安全和有效的预防远未满足需求。本发明提供EV-D68疫苗以满足这些和其它需要。

发明内容

在一个实施方案中，提供了适应vero细胞的肠道病毒D68(EV-D68)，其与SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:3具有95％-100％同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，提供了适应vero细胞的肠道病毒D68(EV-D68)，所述EV-D68具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列且具有至少一个氨基酸取代：

(a)氨基酸残基730被丝氨酸取代(G730S)；

(b)氨基酸残基1028被丙氨酸取代(T1028A)；

(c)氨基酸残基1171被丙氨酸取代(E1171A)；

(d)氨基酸残基1178被赖氨酸取代(E1178K)；

(e)氨基酸残基1365被丝氨酸取代(N1365S)；