[发明专利]一种基于酶解法进行多肽药物样品中杂质定量分析的方法

说明书

本申请公开了一种基于酶解法进行多肽药物样品中杂质定量分析的方法，所述方法包括以下步骤：用蛋白酶将多肽药物样品酶解得到酶解产物，采用液相色谱法对酶解产物进行目标杂质含量测定。所述方法将多肽药物样品酶解成短肽再进行分析，难度大大降低，可以检测样品中杂质的准确含量，为多肽合成的工艺控制提供有力保障。

技术领域

本申请涉及一种基于酶解法进行多肽药物样品中杂质定量分析的方法，属于多肽药物分析技术领域。

背景技术

多肽由于其结构的复杂性，其合成过程中需要控制的杂质非常多，包括非对映异构体、插入肽、缺失肽、断裂肽等。常规的杂质分析方法有液相、质谱分析等，也有基于多肽水解、衍生后测定多肽中氨基酸手性的GC-MS和LC-MS方法。液相分析对于长肽合成中一些消旋杂质和缺失杂质的分离会很困难，质谱对于多肽的手性杂质无法分析，而多肽中氨基酸的手性分析涉及到水解、衍生，过程较为复杂，且处理过程也会产生消旋，定量限一般在0.1％左右，其准确性对于操作的要求也非常高。

发明内容

根据本申请的一个方面，提供一种基于酶解法进行多肽药物样品中杂质定量分析的方法。所述方法将多肽药物样品酶解成短肽再进行分析，难度大大降低，可以检测样品中杂质的准确含量，为多肽合成的工艺控制提供有力保障。

一种基于酶解法进行多肽药物样品中杂质定量分析的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

用蛋白酶将多肽药物样品酶解得到酶解产物，采用液相色谱法对酶解产物进行目标杂质含量测定。

可选地，所述多肽药物样品中的主成分选自生长抑素、索马鲁肽中的任一种；

所述目标杂质选自插入肽杂质Di-Gly²-生长抑素、消旋杂质D-Ala²⁶-索马鲁肽中的任一种。

可选地，所述蛋白酶选自胰蛋白酶、Glu-C蛋白酶、V8蛋白酶中的任一种；

优选地，所述将多肽药物样品酶解为将多肽药物样品酶解至杂质片段含有2～15个氨基酸，杂质片段对应的主成分片段含有2～15个氨基酸。

可选地，当主成分为生长抑素，目标杂质为插入肽杂质Di-Gly²-生长抑素时，所述将多肽药物样品酶解为将多肽药物样品酶解至杂质片段如式I所示，杂质片段对应的主成分片段如式II所示；

可选地，当主成分为索马鲁肽，目标杂质为消旋杂质D-Ala²⁶-索马鲁肽时，所述将多肽药物样品酶解为将多肽药物样品酶解至杂质片段如式III所示，杂质片段对应的主成分片段如式IV所示；

Ile²³-Ala²⁴-Trp²⁵-Leu²⁶-Val²⁷-Arg²⁸ 式III；

Ile²³-DAla²⁴-Trp²⁵-Leu²⁶-Val²⁷-Arg²⁸ 式IV。

可选地，所述方法包括以下步骤：

(S1)将多肽药物样品溶液和蛋白酶溶液混合，放置，得到酶解产物；

(S2)将酶解产物进行HPLC分离、检测，获得色谱图，根据所述色谱图得到所述杂质的含量。

可选地，(S1)中，所述多肽药物样品溶液的浓度为0.1～5mg/ml；

所述蛋白酶溶液的浓度为0.1～5mg/ml；