[发明专利]一种简单快速检测美他环素和/或强力霉素的方法

说明书

本申请公开了一种简单快速检测美他环素和/或强力霉素的方法，采用荧光光谱仪测定加有荧光探针BSA‑AuNCs、表面活性剂的待测溶液的荧光强度，与BSA‑AuNCs的荧光强度相比，如670nm处的红色荧光有降低，525nm处的绿色荧光强度有增强，则待测溶液含有MTC和/或DC成分。本发明的检测方法具有操作简便，快速，灵敏度高、选择性好、检测限低、成本低等优点，不需要大型仪器设备和专业的操作人员，在实际水样的检测中具有良好的加标回收率，检测结果可靠，具有很好的实用性。

技术领域

本发明涉及四环素类抗生素的检测技术领域，具体涉及简单快速、高灵敏检测四环素类抗生素美他环素和/或强力霉素的方法。

背景技术

美他环素(MTC)和强力霉素(DC)属于半合成四环素类抗生素(TCs)，抗菌谱与四环素(TC)相似，对大多数革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、立克次体等均有抑制作用。MTC又叫甲烯土霉素，DC又叫脱氧土霉素或多西环素，其结构式非常相似。与TC相比，MTC和DC的作用范围更广，抗菌活性更强，更容易被细胞吸收。MTC和DC与TCs的其他抗生素存在交叉耐药性，由于四环素类抗生素的广泛应用，临床常见病原菌对TCs也有较强的耐药性。目前，环境中的TCs主要来源于畜禽养殖、医院、药厂排污等。过量的TCs进入环境后影响土壤黏粒、水体环境、微生物生存，进而影响生态系统等。环境中的TCs会通过食物链或食物网进入人体，过量的TCs会引发人体的肝毒性及消化系统的反应、对骨骼和牙齿生长产生影响、产生过敏反应及形成耐药菌等。欧盟和中国对动物源性食品中TCs的限量作了规定，其中TCs在肌肉中最高限值(MRLs)为100μg/kg，肝脏中MRLs为300μg/kg，肾脏中MRLs为600μg/kg，牛奶中规定MRLs为100μg/L(相当于225nmol/L)。

TCs的检测方法主要分为传统检测方法和快速检测方法等，传统检测方法如高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法、微生物检测法、酶联免疫法等。快速检测方法中传感器检测方法最为常见，如比色法、表面增强拉曼光谱法、毛细管电泳法、电化学法、荧光法等。传统的方法虽然普遍使用且灵敏精确，但它们大多无法将单一的抗生素从TCs中区分出来，而且需要较长的前处理时间、复杂的样品制备、昂贵的仪器、专业的技术操作人员等。因此，开发一种可以快速灵敏检测TCs的传感器具有重大意义。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种简单快速、灵敏度高、特异性好的检测MTC和/或DC方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种简单快速检测美他环素和/或强力霉素的方法，采用荧光光谱仪测定加有荧光探针BSA-AuNCs、表面活性剂的待测溶液的荧光强度，与BSA-AuNCs的荧光强度相比，如670nm处的红色荧光有降低，525nm处的绿色荧光强度有增强，则待测溶液含有MTC和/或DC成分。

所述的简单快速检测美他环素和/或强力霉素的方法，在待测定体系中加入的表面活性剂为Tween 20。

所述的简单快速检测美他环素和/或强力霉素的方法，Tween 20的浓度为0.08％。

所述的简单快速检测美他环素和/或强力霉素的方法，在待测定体系中还加入Ca²⁺。

所述的简单快速检测美他环素和/或强力霉素的方法，在待测定体系中加入Ca²⁺的浓度为50μmol/L。

所述的简单快速检测美他环素和/或强力霉素的方法，步骤如下：

1)荧光探针BSA-AuNCs的制备；

2)MTC/DC标准浓度梯度曲线绘制；