[发明专利]聚电解质膜、巨噬细胞外泌体及其在促进BMSCs分化中的应用

权利要求书

1.一种聚电解质膜在制备巨噬细胞外泌体中的应用，其特征在于：

所述的聚电解质膜是由糖胺多糖（GAGs）层和胶原（Col）层交替吸附形成，其总层数为8层；

所述的糖胺多糖为肝素（Hep）；

所述的胶原为I 型胶原（Col I）；

所述聚电解质膜的制备方法包括以下步骤：

（1）将糖胺多糖溶解于NaCl溶液中，配制得到糖胺多糖溶液；将胶原加入冰醋酸溶液A中，搅拌溶解并离心，取上清液，用含有NaCl的冰醋酸溶液B调节浓度，得到胶原溶液；调节糖胺多糖溶液和胶原溶液的pH值为3.9～4.2；

所述的冰醋酸溶液B中含有0.15 M NaCl；

（2）将基底在胶原溶液和糖胺多糖溶液中依次浸泡吸附，得到聚电解质膜，所述聚电解质膜的最外层是糖胺多糖层。

2.一种巨噬细胞外泌体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

取单核巨噬细胞，用完全培养基重悬，加入佛波酯培养2～3天，THP-1细胞分化为M0巨噬细胞，将M0巨噬细胞接种于涂覆权利要求1所述的聚电解质膜的培养器皿中，培养2～3天后，离心，收集含有巨噬细胞外泌体的培养液上清液；从培养液上清液中提取巨噬细胞外泌体。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：提取外泌体包括以下步骤：

上清液以300 g离心10 min，取上清液再以2000 g离心10 min，取上清液再以10000 g离心30 min，取上清液以100000 g离心70 min，弃上清，用适量的PBS将沉淀溶解；最后以100000 g离心70 min，弃上清，用适量的PBS将沉淀溶解，得到巨噬细胞外泌体。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：用完全培养基重悬后，THP-1细胞的密度为(0.5～3)×10⁶ 个/mL；所述M0巨噬细胞的接种密度为(0.5～4) ×10⁶ 个/mL。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的完全培养基是添加10%胎牛血清和1%抗生素的RPMI 1640培养基。