[发明专利]一种用于烟草双黑病生物防治的贝莱斯芽孢杆菌菌剂及应用

权利要求书

1.一种用于生物防治烟草双黑病的生防菌株，其特征在于，所述生防菌株的分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)RJW-5-5，保藏登记号为CGMCC No.22939，保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏时间为2021年07月22日。

2.一种用于生物防治烟草双黑病的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5。

3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂是可湿性粉剂，所述可湿性粉剂中所述贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5的活菌数为3x10⁹ CFU/g-8x10¹¹ CFU/g。

4.一种权利要求3所述的用于生物防治烟草双黑病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5菌株接种到LB固体培养基上进行活化；所述菌株的活化；

(2)将活化后的贝莱斯芽孢杆菌接种到液体种子液培养基中得到培养液，并放到恒温摇床上振荡，温度30-35℃、转速220-270r/min振荡36-60小时，即制得种子液；

(3)制备固体发酵培养物：将步骤(2)获得的种子液以1:8-12(体积/质量)的比例混合固体发酵培养基，进行固体发酵培养；发酵培养条件为：培养温度34-36℃、培养时间4-5d，即制得固体发酵培养物；

(4)可湿性粉剂制备：将步骤(3)获得的固体发酵培养物经过烘干研磨后过200目筛网。然后与任选的载体、润湿剂分散剂、稳定剂等混合，随后烘干制成可湿性粉剂。

5.根据权利要求4所述的用于生物防治烟草双黑病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，

步骤(1)中所述LB固体培养基配方为：酵母浸膏5g，蛋白胨12g，NaCl 5g，琼脂18g，水1000ml，pH 7.5；

步骤(2)中所述液体种子液培养基配方为：12g胰蛋白胨，12g氯化钠，5g葡萄糖，5g酵母浸粉，0.5g磷酸氢二钾，0.5g磷酸二氢钾，0.04g硫酸亚铁，0.04g硫酸镁，1000mL蒸馏水；

步骤(3)中所述固体培养基配方为：：1000g麸皮，1000g豆粕，500g玉米粉，200g酵母浸粉，15g氯化钠，100g蔗糖，2g硫酸镁，0.6g硫酸锰，0.7g硫酸铵，5g磷酸氢二钾，6g磷酸二氢钾，0.3g硫酸亚铁、0.3g碳酸钙。

6.根据权利要求4所述的用于生物防治烟草双黑病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，

步骤(2)中，优选所述温度优选35℃、转速优选250r/min振荡48小时；

步骤(3)中，发酵培养条件优选为：培养温度35℃、培养时间4d。

7.根据权利要求4所述的用于生物防治烟草双黑病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)可湿性粉剂制备的具体步骤为：在步骤(3)获得的固体发酵培养物中加入其重量5％的滑石粉，制成母粉；然后加入润湿分散剂(SDBS和吐温60)、稳定剂CMC-Na以及余量的滑石粉，烘干制成可湿性粉剂；所述可湿性粉剂中各原料成分的重量百分含量为：固体发酵培养物30-50％、润湿分散剂3-6％、稳定剂1-3％，滑石粉余量。

8.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5或者权利要求2-3所述的微生物菌剂或者权利要求4-7所述方法制备得到的微生物菌剂用于防治烟草双黑病的用途，其特征在于，所述烟草双黑病指烟草黑胫病和烟草根黑腐病。

9.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5或者权利要求2-3所述的微生物菌剂或者权利要求4-7所述方法制备得到的微生物菌剂用于促进烟草生长的用途。