[发明专利]一种识别卵巢癌耐药病人细胞外囊泡的核酸适体及其应用

说明书

本发明公开了一种识别卵巢癌耐药病人细胞外囊泡的核酸适体及其应用，属于生物技术领域。本发明通过细胞筛选得到的核酸适体具有较强的亲和力与特异性、较低的免疫原性、能够体外化学合成、成本低、分子量小、可以对核酸适体的不同部位进行修饰和取代、序列稳定、易于保存。本发明核酸适体可以用于制备抗肿瘤药物、制备卵巢癌耐药细胞株或卵巢癌耐药病人血清外泌体检测试剂盒或卵巢癌耐药病人血清外泌体检测探针。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种识别卵巢癌耐药病人细胞外囊泡的核酸适体及其应用。

背景技术

卵巢癌是女性常见三大恶性肿瘤之一，也是当今世界上最致命的恶性妇科肿瘤。目前临床上主要治疗卵巢癌的手段是手术和化疗，其中顺铂、紫杉醇是临床治疗卵巢癌常用的化疗药物。卵巢癌由于早期缺乏典型症状，且卵巢解剖位置较深，确诊时多已为晚期；加之大部分患者对化疗都会出现不同程度的耐药反应，导致卵巢癌患者长期生存率很低。

核酸适体是能够紧密结合特定靶标分子的单链DNA或RNA分子。这些寡核酸链是通过体外指数富集的配体系统进化（SELEX）获得的。核酸适体又称为“化学抗体”，与蛋白质结合时，适体具有许多优势，包括免疫原性低，合成成本低，批次差异小，以及化学修饰简便等优点。Cell-SELEX是指以活细胞为靶标，进行适配体的筛选的一种SELEX技术。Cell-SELEX技术提供了鉴定针对已知生物标志物的适配体和细胞膜表面上的新生物标志物的机会。在Cell-SELEX中，靶分子具有其自身的天然构象，这使得用于治疗和诊断应用的适配体开发更容易。它还减轻了处理靶分子构象的复杂性，并增加了找到有效适配体的可能性。

目前针对核酸适体的研究逐渐增加，中国专利CN111944819A公开了一种快速筛选的卵巢癌核酸适体及其在制备检测卵巢癌制剂中的应用，其公开的核酸适体相较于传统的抗体，具有识别的靶标范围广且特异性强，亲和力强，毒性和免疫原性低的特点，但并不能用于检测卵巢癌病人是否出现耐药性。部分研究针对癌症耐药性的核酸适体，例如中国专利CN109337909A公开了一种检测肝癌耐药细胞株的核酸适体及其应用，但针对鉴别卵巢癌耐药性的核酸适体鲜有研究。

发明内容

本发明提供一种具有较好的亲和力、低免疫原性、分子量小、能够体外化学合成、序列稳定、便于保存、方便标记、易于修饰的核酸适体，可用于区分卵巢癌耐药病人和化疗敏感病人血清中提取的细胞外囊泡。

为达到上述发明目的，采用如下技术方案。

一种识别卵巢癌耐药病人细胞外囊泡的核酸适体，包括如下序列中的至少一种：

（1）如SEQIDNO.1所示的序列；

（2）SEQIDNO.1所示序列的互补序列；

（3）由上述（1）或（2）中序列转录得到的RNA序列。

本发明还提供了一种筛选上述核酸适体的方法，为使用Cell-SELEX筛选。

优选地，使用Cell-SELEX筛选包括如下步骤：

（1）核酸文库和引物的设计；

（2）正筛；

（3）文库的扩增；

（4）ssDNA文库的制备；

（5）反筛；

（6）正筛；

（7）核酸适体循环筛选；

（8）检测。

更优选地，步骤（1）所设计的核酸文库为：

SEQIDNO.2：5’-AAGGAGCAGCGTGGAGGATA(N)₄₅TTAGGGTGTGTCGTCGTGGT-3’。