[发明专利]一种用于检测铁蛋白的单链抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及生物医药领域，公开一种用于检测铁蛋白的单链抗体及其制备方法与应用，旨在提供一种检测准确性高，获得方法简单的用于检测铁蛋白的单链抗体；所述单链抗体氨基酸序列如SEQIDNO.1‑7任意所示；其制备方法包括下述步骤：(1)提取母鸡淋巴细胞，将抗体轻链可变区基因与重链可变区基因进行拼接，与噬菌粒载体连接并转化至感受态大肠杆菌中，构建单链抗体噬菌体展示文库；(2)以铁蛋白作为包被抗原，采用pH洗脱法筛选得到抗铁蛋白的单链抗体噬菌体；(3)将噬菌粒转化至宿主表达菌，进行诱导表达出单链抗体。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种用于检测铁蛋白的单链抗体。

背景技术

铁蛋白是一种无处不在的金属蛋白，具有纳米大小的水合氧化铁核心和具有笼状结构的蛋白质壳，存在于大多数身体的组织并在其中起着重要的作用细胞内铁的储存。测定血清铁蛋白对判断体内铁储存，机体在增殖、免疫抑制、致癌作用和血管生成等的情况发挥重要作用。血清铁蛋白升高与恶性肿瘤，如乳腺癌、肝细胞癌癌、非霍奇金淋巴瘤和肾细胞癌具有相关性。此外，血清铁蛋白升高与乳腺癌、胰腺癌和胃癌等的预后不良有关。铁蛋白可能是一种显着的各种癌症类型的诊断和预后的生物标志物。

目前，血清、血浆或其他生物体液的铁蛋白均可用放射性、非放射性免疫分析方法和乳胶凝集试验进行测定。不同于传统的单克隆抗体，重组抗体的生产成本更低，均一性好。因此，开发出采用噬菌体展示技术和原核表达技术制备的抗铁蛋白单链抗体势在必行。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测准确性高，获得方法简单的用于检测铁蛋白的单链抗体。

本发明提供的第一个技术方案如下：

一种用于检测铁蛋白的单链抗体，所述单链抗体氨基酸序列如SEQIDNO.1-7任意所示。

本发明提供的第二个技术方案如下：

上述单链抗体的方法，依次包括下述步骤：

(1)提取母鸡淋巴细胞，将抗体轻链可变区基因与重链可变区基因进行拼接，与噬菌粒载体连接并转化至感受态大肠杆菌中，构建单链抗体噬菌体展示文库；

(2)以铁蛋白作为包被抗原，采用pH洗脱法筛选得到抗铁蛋白的单链抗体噬菌体；

(3)将噬菌粒转化至宿主表达菌，进行诱导表达出单链抗体。

进一步的，上述的一种用于检测铁蛋白的单链抗体的制备方法，所述的单链抗体噬菌体展示文库的构建方法包括：

3)首先在scFv抗体基因片段的两端引入了两个SfiI酶切位点；

4)SfiI酶切位点直接与pComb3Xss载体进行酶切重组，并用T4连接酶进行连接。

进一步的，上述的一种用于检测铁蛋白的单链抗体，所述的scFv抗体基因片段的两端引入了两个SfiI酶切位点的采用的试剂和用量分别为：10×BufferM20μl；pComb3Xss20μg；SfiI酶1μl；RNasefreeH2O补至200μl。

进一步的，上述的一种用于检测铁蛋白的单链抗体的制备方法，所述的scFv抗体基因片段的两端引入了两个SfiI酶切位点的采用的方法为：将步骤5)所述的试剂置于PCR仪中，50℃，孵育5h；加入22.5μl0.5MEDTA，混匀，使SfiI酶失活；将酶切产物通过0.7％琼脂糖凝胶电泳检测酶切效果；回收酶切产物。

进一步的，上述的一种用于检测铁蛋白的单链抗体的制备方法，所述的SfiI酶切位点直接与pComb3Xss载体进行酶切重组采用的试剂及其用量为：10×Ligasebuffer20μl；酶切后的pComb3xss载体1.4μg；酶切后的scFv基因片段700ng；T4DNA连接酶10μl；RNasefreeH2O补至200μl。