[发明专利]一株高产罗伊氏菌素的罗伊氏乳杆菌LR4009及其应用

说明书

本发明公开了一株高产罗伊氏菌素的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)LR4009及其应用，所述菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2020701，保藏日期为2020年11月9日。所述菌株转化生产罗伊氏菌素的能力高达632mmol/L，显著高于现有菌株；将其制备成冻干粉，所述冻干粉中活菌数高达2300亿/g，将所述冻干粉单独使用或与载体混匀后制备成食品或保健品食用有助于增强机体免疫力；本发明所述罗伊氏乳杆菌还具有高耐酸活性及耐胆盐活性，能够确保菌株有效通过胃液和胆盐到达肠道，在复杂的肠道环境中增殖。

【技术领域】

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株高产罗伊氏菌素的罗伊氏乳杆菌LR4009及其应用。

【背景技术】

罗伊氏乳杆菌是由卫计委公布的食品中可用的乳酸杆菌，国际上公认的益生乳酸菌，具有很高的理论研究和生产应用价值，天然存在于人和动物的肠道系统中。

罗伊氏乳杆菌能代谢甘油产生一种非蛋白类的广谱抗菌物质罗伊氏细菌素，研究表明，罗伊氏菌素是以3-羟基丙醛(3-HPA)为代谢中心的复杂的动态混合体系，其成分主要包括三羟基丙醛、三羟基丙醛的水合物和三羟基丙醛二聚体。罗伊氏菌素能广泛抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母、真菌和病原虫等病原菌的生长，同时，罗伊氏菌素对病毒的复制同样具有有效的抑制作用。此外，由于其结构的独特性，它的抑菌活性不会被蛋白酶破坏，具有较强的稳定性。

目前利用罗伊氏乳杆菌生产罗伊氏菌素的产量普遍小于150mmol/L；由于罗伊氏菌素对细胞有毒害作用，限制了体外高浓度的积累。本研究旨在筛选出一株高产罗伊氏菌素的罗伊氏乳杆菌，并优化罗伊氏乳杆菌生产罗伊氏菌素的条件，提高罗伊氏细菌素的生产效率和产量，并形成同时含有罗伊氏乳杆菌及罗伊氏菌素的相关产品。

【发明内容】

针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于，提供一株罗伊氏菌素产量高，且具有高耐酸、耐胆盐能力的罗伊氏乳杆菌LR4009，并研究其在增强机体免疫力方面的应用。

为了实现上述技术效果，本发明采用如下技术方案：

一株高产罗伊氏菌素的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)LR4009，所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)LR4009来源于天然发酵食品内蒙古奶豆腐，将其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2020701，保藏日期为2020年11月9日。

本发明的第二目的在于，提供所述罗伊氏乳杆菌LR4009转化生产罗伊氏菌素的方法，具体地，包括如下步骤：

(1)菌种活化：选择罗伊氏乳杆菌LR4009菌种，并将其接种于固体斜面培养基上进行活化；

(2)一级种子培养：取活化后的固体培养基斜面，在无菌条件下接种于种子液体培养基中，于30-37℃条件下静置培养12-16h，制得一级种子液；

(3)二级种子培养：取1～5％的一级种子液接种于种子液体培养基中，于30-37℃条件下静置培养12-16h，制得二级种子液；

(4)发酵罐发酵：取1～5％的述二级种子液接于发酵罐液体发酵培养基中，于30-37℃条件下，静置培养。

(5)发酵菌泥收集：收集发酵罐中发酵12小时后的发酵液并离心，获得发酵菌泥；

(6)菌泥处理：将所述发酵菌泥中加入含辅酶B12的甘油溶液中反应，得到菌泥反应体系，检测罗伊氏菌素含量备用。

优选地，步骤(2)中所述的种子液体培养基包括：葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L和酵母膏5g/L，调节pH至5.5-6.5，115℃条件下灭菌20min。