[发明专利]一种基于蛋白的磁性琼脂糖多孔微球及其制备方法

说明书

本发明涉及一种基于蛋白的磁性琼脂糖多孔微球及其制备方法，属于琼脂糖微球技术领域。本发明所述的制备方法，包括以下步骤，先将硅羟基改性的磁性纳米粒子、琼脂糖、油相材料和乳化剂混匀，60‑70℃搅拌反应15‑25min，得到磁性琼脂糖微球；后在碱性条件下，所述的磁性琼脂糖微球中加入交联剂、环氧活化剂，45‑55℃反应6‑18h，得到活化的磁性琼脂糖微球；最后在碱性条件下，向所述的活化的磁性琼脂糖微球中加入蛋白A，1‑10℃反应20‑28h，得到所述基于蛋白的磁性琼脂糖微球。本发明所述的磁性琼脂糖多孔微球具有耐碱性，其耐碱范围pH为10‑14可以使得琼脂糖微球保持化学稳定性，并且结合免疫球蛋白的IgG的能力最大可达60mg/mL。

技术领域

本发明涉及琼脂糖微球技术领域，尤其涉及一种基于蛋白的磁性琼脂糖多孔微球及其制备方法。

背景技术

随着生物技术的发展，新抗体不断涌现，一般而言，新抗体的开发过程需要经过高通量筛选过程，在这个过程中，纯化和清洗必不可少，NaOH等碱性溶剂是常用到的清洗剂。琼脂糖微球做为生物相容性较好而成为生物蛋白分离领域中应用最广泛的分离柱中的固定相基质。然而，目前采用的磁性琼脂糖筛选柱的耐碱性受到了限制，结合自动化设备处理样品无法实现高通量筛选，纯化过程中使用NaOH清洗多次后，出现IgG负载量下降等现象。解决耐碱性问题是目前磁性琼脂糖微球存在的通性问题。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中IgG滞留时间长，耐碱性差的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种基于蛋白的磁性琼脂糖多孔微球及其制备方法。

本发明的第一个目的是提供一种基于蛋白的磁性琼脂糖微球的制备方法，包括以下步骤，

(1)将硅羟基改性的磁性纳米粒子、琼脂糖、油相材料和乳化剂混匀，60-70℃搅拌反应15-25min，得到磁性琼脂糖微球；

(2)碱性条件下，向步骤(1)所述的磁性琼脂糖微球中加入交联剂、环氧活化剂，45-55℃反应6-18h，得到活化的磁性琼脂糖微球；

(3)碱性条件下，向步骤(2)所述的活化的磁性琼脂糖微球中加入蛋白A，1-10℃反应20-28h，得到所述基于蛋白的磁性琼脂糖微球。

在本发明的一个实施例中，在步骤(1)中，所述磁性纳米粒子为四氧化三铁和/或镍的一种或多种；所述硅羟基改性的磁性纳米粒子是通过碱性水解硅源，在磁性纳米粒子表面包覆硅层所得。

在本发明的一个实施例中，所述硅源为正硅酸乙酯、硅酸钠和四甲氧基硅烷中的一种或多种。

在本发明的一个实施例中，在步骤(1)中，所述油相材料为石蜡油、环己烷、植物油和正庚烷中的一种或多种；所述乳化剂为司班80、司班85、吐温20、吐温60和吐温80中的一种或多种。

在本发明的一个实施例中，在步骤(1)中，所述硅羟基改性的磁性纳米粒子、琼脂糖、油相材料和乳化剂的质量比为9-11：0.3-0.5：28-32：1。

在本发明的一个实施例中，在步骤(1)中，还包括降温步骤，所述降温的速率为4-6℃/min；所述降温是降温至20-30℃。

在本发明的一个实施例中，在步骤(2)中，所述交联剂为丙二醇二环氧丙酯；所述环氧活化剂为1，4-丁二醇二缩水甘油醚。

在本发明的一个实施例中，在步骤(2)中，所述磁性琼脂糖微球、交联剂和环氧活化剂质量比为1：0.1-0.3：0.1-0.15。

在本发明的一个实施例中，在步骤(3)中，所述的蛋白A为ProteinA。

在本发明的一个实施例中，在步骤(3)中，所述的活化的磁性琼脂糖微球、蛋白A的质量比为1：0.02-0.04。