[发明专利]一种生物样品的处理方法

说明书

本发明涉及一种生物样品的处理方法，尤其涉及一种含有小儿消积止咳口服液代表成分及其代谢产物的生物样品的处理方法，属于医药技术领域。该方法是将生物样品采集后加入0.1％甲酸生理盐水或甲醇作为稳定剂；测定游离成分时，生物样品采用有机溶剂直接沉淀法处理；测定总成份时，先用酶水解，再用有机溶剂沉淀；沉淀用的有机溶剂为乙腈。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种生物样品的处理方法，具体涉及一种含有小儿消积止咳口服液代表成分及其代谢产物的生物样品处理方法。

背景技术

小儿消积止咳口服液/颗粒由鲁南厚普制药有限公司独家生产，清热肃肺，消积止咳。用于小儿饮食积滞、痰热壅肺所致的咳嗽、夜间加重、喉间痰鸣、腹胀、口臭。成份包括：炒山楂、槟榔、枳实、蜜枇杷叶、瓜蒌、炒莱菔子、炒葶苈子、桔梗、连翘、蝉蜕。方中山楂、槟榔，消食导滞，食积得消，则郁热痰浊无依、生热生痰无源。以枇杷叶、瓜蒌、桔梗、连翘清肺化痰，宣散肺气，痰热消，肺热清，肺气降，则咳嗽自止。葶苈子泻肺平喘，莱菔子消食化积兼降气化痰，蝉蜕清肺热、宣肺热，枳实行气消痰。桔梗除宣散肺气、祛痰止咳外，还能引导诸药直达病所。诸药合用，达到消积化痰，宣肺止咳的功效。

小儿消积止咳口服液的质量控制成分为枳实的主成分辛弗林，目前对于口服小儿消积止咳口服液后，辛弗林的体内代谢情况研究较少，特别在幼龄动物体内，还面临采样困难，样品量少的问题。

2020年11月26日，IARC在《柳叶刀-肿瘤学》发表了对槟榔主要活性成分—槟榔碱(arecoline)致癌性的主要评估结论，槟榔碱被定为2B类致癌物。鉴于小儿消积止咳口服液中含有槟榔这味药材，对其主要活性成分槟榔碱的吸收入血情况进行考察颇有必要。

药物在生物样品处理过程中的稳定性是样品处理过程中的关键。例如槟榔碱在血液中不稳定，2小时后血液内的槟榔碱浓度降低到原来的15％。如何保证在样品处理过程中待测成分保持稳定且不影响测定是急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生物样品的处理及测定前预处理的方法，所述的生物样品中含有小儿消积止咳口服液和/或小儿消积止咳颗粒中的质量控制成分(辛弗林)和毒性成分(槟榔碱)，以及辛弗林的Ⅱ相代谢产物(葡萄糖醛酸结合型辛弗林)和槟榔碱的Ⅰ相代谢产物(槟榔次碱)。

所述的生物样品包括但不限于血液、胆汁、脏器、尿液、粪便等。

本发明所述的生物样品的处理方法为：生物样品采集后用甲酸生理盐水或甲醇作为稳定剂；优选的，所述甲酸生理盐水为0.1％甲酸生理盐水。

在进行成分检测时，辛弗林的Ⅱ相代谢产物将通过将生物样品酶解后测定总的辛弗林来实现，其他成分通过直接测定生物样品中的游离药物浓度来实现。

因此，本发明所述的生物样品的测定前预处理方式为：

(1)检测游离成分时，取上述加入稳定剂的生物样品，加入内标液和沉淀溶剂混合，取澄清液体分析；

和/或

(2)检测总药物浓度时，取上述加入稳定剂的生物样品，加入甲酸生理盐水和酶溶液，混合，温孵后加入内标液和沉淀溶剂，混合，取澄清溶液分析。

优选的，测定前处理方法中沉淀溶剂为乙腈；甲酸生理盐水为0.1％甲酸生理盐水。

具体的，本发明上述所述的生物样品的处理方法包括如下步骤：

1.生物样品处理：血液、胆汁、尿液等生物样品与等体积0.1％甲酸生理盐水或甲醇混合，脏器、粪便等组织取样后立即用相应体积的0.1％甲酸生理盐水或甲醇研磨，离心，取上层澄清液体作为待测液；

2.测定前预处理：

(1)检测游离成分时，取上述处理后的生物样品，加入内标液和乙腈沉淀液，涡旋混匀，离心，取上清液分析。