[发明专利]牛赤羽病病毒疫苗

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种牛赤羽病病毒疫苗。本发明提供制备牛赤羽病病毒疫苗的蛋白，包括牛赤羽病病毒的G1蛋白和牛赤羽病病毒的G2蛋白，其中，编码G1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码G2蛋白的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。该蛋白适用于真核细胞表达系统，改变了牛赤羽病病毒疫苗活性成分制备的工艺，同时降低了成本。并且，该蛋白具有广谱抗原性，可以实现良好的交叉保护效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种牛赤羽病病毒疫苗。

背景技术

赤羽病又名阿卡斑病(Akabane disease)，是由赤羽病病毒(Akabane virus，AKAV)所引起的牛、绵羊和山羊的一种多型性传染病，以牛、羊的流产、早产、死产及先天性关节弯曲和积水性无脑症(Arthrogryposis–Hydraencephaly，AH综合症)为特征，是危害反刍动物最重要的传染性病毒之一。目前的牛赤羽病病毒疫苗主要有以下形式：1、活疫苗为30℃下在Hmlu-1细胞上致弱的弱毒疫苗；2、灭活疫苗是将OBE-1株AKAV接种Hmlu-1细胞，出现细胞病变时收集细胞培养液，3000rpm离心10min，取上清应用或置于8℃低温保存备用，制备疫苗时加入0.1％福尔马林。上述两种方法均为常规方法，生产工艺复杂，需要耗费较多的人力物力，且引入动物源蛋白，对疫苗的安全性存在潜在风险。

目前国内该疫病流行广泛，造成了重大的经济损失。尚无该产品上市，有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种牛赤羽病病毒疫苗及其制备方法。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种免疫原性组合物，包含牛赤羽病病毒G1蛋白和G2蛋白。

本发明中，编码G1蛋白和G2蛋白的核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

优选地，牛赤羽病病毒G1蛋白和G2蛋白是利用哺乳动物细胞(如CHO细胞)表达系统制备得到的。

第二方面，本发明提供一种牛赤羽病病毒疫苗及其制备方法，包含所述免疫原性组合物和佐剂。

所述疫苗中牛赤羽病病毒G1蛋白的含量为20-80μg/mL，G2蛋白的含量为20-80μg/mL。

优选地，所述疫苗中牛赤羽病病毒G1蛋白的含量为60μg/mL，G2蛋白的含量为60μg/mL。

所述佐剂可以是氢氧化铝胶、矿物油、卡波姆、Gel01、Gel02、纳米佐剂、蜂胶、ISA206或ISA760VG，优选矿物油佐剂。

所述免疫原性组合物与所述佐剂的质量比为1:1。

第三方面，本发明提供牛赤羽病病毒疫苗的制备方法，包括以下步骤：

1)用PBS溶液将牛赤羽病病毒G1蛋白和G2蛋白分别稀释成浓度为120μg/mL、120μg/mL；

2)将G1蛋白和G2蛋白溶液按体积比1:1混匀即为抗原液；将抗原液与矿物油佐剂按质量比1:1配苗，在31±1℃条件下，以150-350r/min搅拌30-60分钟，乳化成水包油包水型疫苗。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

(一)本发明提供的免疫组合物，牛赤羽病病毒G1蛋白和G2蛋白适用于真核细胞表达系统，可以稳定高产量表达，纯度高，抗原免疫性强，可有效应用于该病的研究和诊断。

(二)本发明提供的牛赤羽病病毒疫苗，其制备方法简单，且中和抗体结果明显，可有效激活机体的免疫反应，该疫苗生产成本低，广谱性强，对牛赤羽病起到理想的免疫保护作用。

具体实施方式