[发明专利]一株农药中间体降解菌株、培养方法及其菌剂和应用

权利要求书

1.一株农药中间体降解菌株，其特征在于，所述降解菌株为反硝化无色杆菌（Achromobacter denitrificans）PH-1，于2021年12月6日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏号为：CGMCC NO.24038。

2.一种权利要求1所述的降解菌株PH-1在高盐条件下降解农药中间体及下游产品中的应用，所述高盐条件为氯化钠浓度为10~80 g/L，所述农药中间体为2-氯-5-氯甲基吡啶，所述下游产品为吡虫啉、氟啶胺和精吡氟禾草灵中的一种或多种。

3.一种利用权利要求1所述的降解菌株PH-1生产的菌剂。

4.一种权利要求3所述的菌剂在高盐条件下降解农药中间体及下游产品中的应用，所述高盐条件为氯化钠浓度为10~80 g/L，所述农药中间体为2-氯-5-氯甲基吡啶，所述下游产品为吡虫啉、氟啶胺和精吡氟禾草灵中的一种或多种。

5.一种权利要求3所述的菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

S1、将斜面保存的菌株PH-1，接种至LB固体培养基中进行活化培养；

S2、将活化后的菌株PH-1挑取单菌落接种至LB液体培养基，培养至对数生长期，然后离心收集菌体细胞，菌体细胞用磷酸盐缓冲液洗涤，将收集的细菌细胞悬浮在磷酸盐缓冲液中，作为种子液；

S3、将种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养，培养至对数生长期，发酵结束后所得发酵液即为降解菌剂。

6.根据权利要求5所述菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，培养条件为：温度25~35℃，时间12~24h；LB固体培养基的组份如下：蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、NaCl10g/L和琼脂2%。

7.根据权利要求5所述菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，培养条件为：温度30~35℃，转速160~180rpm时间12~24h；LB液体培养基的组份如下：2-氯-5-氯甲基吡啶0.5g/L、蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L和NaCl 10g/L。

8.根据权利要求5所述菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，发酵培养基的组份如下：葡萄糖8g/L、酵母提取物5g/L、K₂HPO₄ 1g/L、NaCl 5g/L、CaCO₃ 2g/L、MgSO₄ 0.2 g/L和2-氯-5-氯甲基吡啶0.5g/L，pH值7.2~7.5；发酵培养条件为：无菌空气的通气量与发酵培养基的体积比为1：0.6~1.2，搅拌速度为180~240rpm，培养温度为30~35℃，全流程培养时间为96~108h。