[发明专利]一种肺炎支原体检测装置及检测方法

权利要求书

1.一种肺炎支原体检测装置，其特征在于，包括外壳(1)、进出样模块(2)、反应容器(3)、供料模块(4)、加热模块(5)、荧光检测模块(6)和控制模块(7)，其中：

所述进出样模块(2)、所述反应容器(3)、所述供料模块(4)、所述加热模块(5)、所述荧光检测模块(6)和所述控制模块(7)均设置于所述外壳(1)内，所述反应容器(3)具备加热腔(31)，所述供料模块(4)的供料泵(40)伸入所述加热腔(31)内，所述加热腔(31)的进出样开口(310)设置于所述外壳(1)上，所述进出样模块(2)能够通过所述进出样开口(310)进入并放置于所述加热腔(31)内，所述反应容器(3)的外壁与所述加热模块(5)相互贴合；

所述进出样模块(2)包括多个反应管(20)，所述反应容器(3)的外壁(30)及所述反应管(20)均由透明材料制成；

所述供料模块(4)通过供料泵(40)为所述进出样模块(2)加料，所述荧光检测模块(6)正对所述反应容器(3)及所述进出样模块(2)；

所述控制模块(7)与所述供料模块(4)、所述加热模块(5)、所述荧光检测模块(6)均相连。

2.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置，其特征在于，所述加热模块(5)至少具备35℃和37℃两个恒温温度。

3.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置，其特征在于，所述供料泵(40)包括中空的伸缩臂(400)和泵体(401)，所述伸缩臂(400)通过所述泵体(401)与所述供料模块(4)的储藏罐(41)相连，所述泵体(401)用于通过所述伸缩臂(400)将药剂从储藏罐(41)内泵出。

4.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置，其特征在于，所述供料模块(4)至少用于分步添加所述正向引物、所述反向引物和所述LbCas12a-gRNA复合物。

5.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置，其特征在于，所述反应容器(3)还包括保护盖(32)，所述保护盖(32)与所述加热腔(31)形状配合并能够封闭所述进出样开口(310)。

6.一种利用如权利要求1至5任一所述的肺炎支原体检测装置进行肺炎支原体检测方法，其特征在于，包括下列步骤：

在所述进出样模块(2)内通过ERA扩增样本序列，所述样本序列包括靶序列或目的序列，得到扩增产物；

选取gRNA序列，基于所述gRNA序列制备LbCas12a-gRNA复合物，所述LbCas12a-gRNA复合物包含荧光探针；

通过所述供料模块(4)向所述进出样模块(2)内添加所述LbCas12a-gRNA复合物，在所述进出样模块(2)内将所述扩增产物与所述LbCas12a-gRNA复合物混合并进行扩增循环，若所述荧光检测模块(6)判断存在荧光效应，则判断所述样本中存在肺炎支原体。

7.如权利要求6所述的肺炎支原体检测方法，其特征在于，所述ERA扩增样本序列包括：

选取正向引物和反向引物，通过ERA扩增所述样本序列，所述正向引物的序列至少如SEQ ID No.3或SEQ ID No.4任一所示，所述反向引物的序列至少如SEQ ID No.5或SEQ IDNo.6任一所示。

8.如权利要求6所述的肺炎支原体检测方法，其特征在于，所述gRNA的序列为多个。

9.如权利要求8所述的肺炎支原体检测方法，其特征在于，所述gRNA序列至少如SEQ IDNo.1或SEQ ID No.2任一所示。

10.如权利要求6所述的肺炎支原体检测方法，其特征在于，所述基于所述gRNA序列制备LbCas12a-gRNA复合物包括：

将150nM的LbCas12a与60nM的所述gRNA在5×NEBuffer 2.1中37℃预孵育10分钟；

以300nM的终浓度加入F-Q探针，即得到所述LbCas12a-gRNA复合物。