[发明专利]一种检测泛酰巯基乙胺酶活性的化学发光探针、制备方法及其生物应用

权利要求书

1.一类泛酰巯基乙胺酶激活型化学发光探针，其特征在于，其结构通式如下：

其中：L选自L₁、L₂和L₃，L₁、L₂和L₃的结构如下所示：

2.权利要求1所述的泛酰巯基乙胺酶激活型化学发光探针的制备方法，其特征在于，化合物1和化合物2-1或化合物2-2反应得到化合物3，经过单线态氧氧化得到化合物4，化合物4通过脱保护得到化学发光探针化合物5，合成路线如下：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)中间体化合物3的合成

合成连接臂为L₁或L₃的化合物3：将化合物1和三光气在惰性气体保护下溶于无水二氯甲烷溶液中，在0～4℃条件下搅拌反应0.1～1h，加入DIPEA后继续搅拌反应0.1～1h，然后滴加化合物2-1或化合物2-2的无水二氯甲烷溶液，室温搅拌反应3～10h，通过硅胶色谱纯化得到化合物3；

合成连接臂为L₂的化合物3：在化合物2-2的无水二氯甲烷溶液中加入2，4-甲基苯磺酰氯和三乙胺，在0～4℃条件下搅拌反应3～7h，通过硅胶色谱纯化，将纯化的产物与化合物1、碳酸钾、碘化钠溶于无水乙腈，混合物在60～100℃的条件下反应3-8h，通过硅胶色谱纯化得到化合物3；

(2)中间体化合物4的合成

将化合物3和亚甲蓝溶于CDCl₃，冰浴条件下，在用640～680nm的光照射的同时，向反应溶液中通入氧气，通过RP-HPLC监测反应，待氧化反应完全后，除去亚甲基蓝，得到化合物4；

(3)探针化合物5的合成

在0～4℃条件下，向所得的化合物4中加入体积百分数为80％乙酸水溶液，避光条件下搅拌进行脱保护反应，通过TLC监测反应，反应结束后，纯化得到化合物5。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述化合物1的浓度为1～50mg/mL，化合物1和三光气的投料质量比为3:1～1:1；DIPEA的加入量为反应体系总体积的0.1～10％；化合物1与化合物2-1或化合物2-2的投料质量比为3:1～1:3；所述惰性气体为氩气、氦气、氮气中一种或二种以上的组合。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述化合物3的浓度为1～20mg/mL，化合物3和亚甲蓝的投料质量比为100:1～2:1。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中使用乙酸乙酯快速过柱的方式除去亚甲基蓝。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述纯化的具体过程为：向反应溶液中添加碱性水溶液调pH至中性，加入CH₂Cl₂，并用饱和食盐水萃取2～5次，收集有机相并用无水Na₂SO₄干燥，通过硅胶色谱纯化得到化合物5。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述碱性水溶液为饱和Na₂CO₃水溶液。

9.权利要求1所述的泛酰巯基乙胺酶激活型化学发光探针在泛酰巯基乙胺酶检测中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用为用于活细胞或活体动物中泛酰巯基乙胺酶活性的检测。