[发明专利]基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球的制备方法和应用

权利要求书

1.基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)以双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑分子作为聚集诱导发光材料(AIE)溶解在四氢呋喃溶液中，为A液；

(2)将羧基表面的聚苯乙烯微球分散于十二烷基磺酸钠水溶液中，为B液；

(3)将A液加入丙酮中混匀，再一边搅拌一边加入B液，室温下磁力搅拌10-20h蒸发丙酮至少量，离心得到产物用超纯水洗涤，获得基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球悬浮分散于超纯水中。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的聚苯乙烯微球粒径为250-350nm；所述步骤(1)中AIE的分子结构式为：

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：B液中聚苯乙烯微球与A液中AIE的质量比为1∶0.5-1.5，B液与丙酮的体积比为1∶3。

4.如权利要求1至3任一方法制备的基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球的应用，其特征在于：所述聚集诱导发光微球用于制备定量检测降钙素原免疫层析试纸条。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述免疫层析试纸条包括PVC底板、硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫和吸水垫，所述结合垫上喷涂有基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球制备成的探针。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述探针的制备步骤具体为：向PB缓冲液中加入基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球，再加入标记抗体，静电吸附15min后加入EDC活化微球表面羧基，之后加入蛋白封闭剂封闭微球表面未与抗体结合的羧基，孵育后离心，弃去上清液，沉淀用复溶液复溶制备成探针；制备的探针溶液喷涂到结合垫上，干燥备用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：PB缓冲液的pH为5.5-8.0；加入标记抗体后的抗体终浓度为1～100μg/mL；加入EDC后其终浓度为0.01～1mg/mL；加入封闭剂后封闭剂的终浓度为1.5～3％，且所述封闭剂选自酪蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、脱脂牛奶中的任意一种。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：离心的转速为12000-14000rpm，时间为10～30min；沉淀用AIE复溶液复溶为起始体积的1倍至1/10倍。

9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述硝酸纤维素膜设有检测区和控制区，所述检测区和控制区内分别设有荧光条带，所述检测区的荧光条带上设有检测线，所述检测线使用包被抗体，所述控制区的荧光条带上设有控制线，所述控制线上使用二抗；所述硝酸纤维素膜的制备步骤如下：

①使用0.01～0.5M pH 6.0～8.0的PB溶液分别稀释包被抗体以及二抗的浓度为0.01～10.0mg/mL；

②将调整浓度后的包被抗体喷涂于硝酸纤维素膜上部，作为检测线，将二抗喷涂于硝酸纤维素膜下部，作为控制线；其中，检测线和控制线之间间隔一定距离，二者的喷膜量一致，均为0.25～0.74μL/cm；

③将喷涂有检测线和控制线的硝酸纤维素膜于37℃过夜烘干处理后，在室温干燥的环境下保存备用。

10.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述免疫层析试纸条检测降钙素的过程具体为：经过处理后的检测样本加样到所述免疫层析试纸条上，加体积为50～200μL，反应时间为5～30min，通过读取试纸条的荧光数据后由内置标准曲计算检测样本浓度来实现定量检测，或者通过使用不同波长的手电筒对试纸条照射后观察检测线和控制线有无荧光来实现对检测样本的定性判断。