[发明专利]一种抗FOLR1/VEGF的全人双特异性抗体及其筛选方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗FOLR1/VEGF的全人双特异性抗体及其筛选方法和应用。所述全人双特异性抗体由抗人FRα抗体和抗人VEGF抗体联合构建而成，其筛选方法简单，通过从卵巢癌患者来源的腹水中分选获得单个抗原特异性靶向的B细胞，最终构建了一个全新的双特异性抗体，所述抗体为来自人体的全人抗体，其免疫原性低，靶向性好，可以同时靶向FOLR1和VEGF，具有很好的肿瘤杀伤活性，能够抑制血管生成和肿瘤生成。

技术领域

本发明属于免疫学和生物技术领域，具体涉及一种抗FOLR1/VEGF的全人双特异性抗体及其筛选方法和应用。

背景技术

卵巢癌是导致女性死亡率最高的一种癌症，65-75％的卵巢癌患者在确诊时已经处于晚期(III期和IV期)，卵巢癌腹水是卵巢癌晚期的主要症状，卵巢癌腹水是肿瘤发生转移的表现。研究发现卵巢癌患者的腹水中含有多种类型的免疫细胞，腹水有可能是卵巢癌的Tertiary lymphoid structures(TLSs)，但目前还没有研究来阐明卵巢癌患者腹水中的免疫细胞在卵巢癌转移和恶化中的作用。

FRα由FOLR1编码，是分子量38-40KD的细胞表面糖蛋白。FRα被证实在实体瘤中有广泛高表达，比如间皮瘤(72-100％)，三阴性乳腺癌(35-68％)，卵巢癌(76-89％)，非小细胞肺癌(14-74％)；而非恶性组织，只有肺部顶端支气管的上皮细胞，有一定比例的表达。FRα在恶性肿瘤的特异性表达，使之成为一个良好的抗肿瘤药物开发靶点。因而小分子药物、抗体药物、双特异性抗体、CAR-T、ADC、叶酸-细胞毒性药物偶联药物等不同形式的药物都在开发中。进展较快的如：Mirvetuximab soravtansine、Farletuzumab等均已经处于临床试验阶段。

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是最重要的促血管生成因子，可在体内诱导血管的新生。VEGF在肿瘤生成和湿性黄斑变性等眼科疾病发生中扮演重要的角色。在多数恶性肿瘤如结肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、肾癌、神经胶质瘤、子宫癌、食管癌、胃癌、卵巢癌等组织中均检测到了VEGF及其受体的明显表达，且其表达水平与恶性肿瘤的发生、发展存在密切关系。VEGF是维持恶性肿瘤快速生长、促进其播散转移、预测患者生存预后的关键细胞因子。靶向VEGF的贝伐珠单抗在多重恶性肿瘤的临床治疗显示疗效，在妇科肿瘤治疗方面也已广泛应用。

与单克隆抗体不同，双特异性抗体具有同时靶向2个不同表位的能力，并能起到特殊的生物学功能，例如免疫细胞召集、受体共刺激或共抑制、多价病毒中和等。双特异性抗体根据结构左右对称性分为对称结构和不对称结构，根据IgG分子完整性分为类完整抗体和类抗体片段，以及根据抗原结合区域的数量构型分为两价、三价、四价或更多价的构型等。不同的双特异性抗体设计各有利弊，但是以临床治疗为目的的双特异性抗体设计都要解决同样的问题：第一，保证两对(或以上)不同轻链与重链的正确偶合或配对；第二，保持每个单克隆抗体各自结合域的独立性，同时结合不同表位的时候互相之间不会产生空间位阻的干扰；第三，抗体分子要易于用哺乳动物细胞进行表达，不需要复杂的蛋白修饰工艺，有较好的成药性。

构建并开发可以应用于临床治疗的双特异性抗体需要亟需解决以下几个问题：一是轻重链的正确配对，二是分子的成药性，三是要做到各个结合域不能互相干扰，最后还要注意免疫原性，尽量减少突变位点和额外的肽链，同时又能够利用现有的细胞及纯化工艺进行高效规模化生产。现在国际上比较主流的双特异性抗体平台有DVDIg(艾伯维)、CrossMab(罗氏)、Duobody(GenMab)等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗FOLR1/VEGF的全人双特异性抗体，所述全人双特异性抗体免疫原性低，靶向性好。

本发明的另一目的在于提供一种全人双特异性抗体的筛选方法，其步骤简单，成功率高。

本发明的另一目的在于提供抗FOLR1/VEGF的全人双特异性抗体的应用。