[发明专利]表达猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体的重组腺病毒及其构建和用途

说明书

本发明涉及表达猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体的重组腺病毒及其构建和用途。本发明的重组腺病毒基因组中至少具有由如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的猪抗体重链可变区VH和如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的猪抗体轻链可变区VL以及由中间连接肽Linker构成的猪源单链抗体片段VH‑Linker‑VL。重组腺病毒表达的单链抗体ZW4‑36能够与猪流行性腹泻病毒N蛋白特异性结合，抑制猪流行性腹泻病毒对仔猪空肠组织的感染，显著降低仔猪粪便中的病毒粒子含量(P0.05)，对猪流行性腹泻病毒感染仔猪具有有效的保护作用。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其是涉及表达猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体的重组腺病毒及其构建和用途。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)感染猪引起猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，PED)，导致猪腹泻、脱水、食欲不振、甚至导致猪死亡。各年龄段的猪都会被感染，年龄越小的猪，临床表现越严重。疫苗接种是预防该病的方法之一，但是由于病毒毒株变异速度快，目前研制的疫苗的预防效果并不理想。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明提供一种表达猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体的重组腺病毒及其构建和用途。

本发明提供的重组腺病毒表达的单链抗体ZW4-36能够与猪流行性腹泻病毒N蛋白特异性结合，减弱猪流行性腹泻病毒对仔猪空肠组织的感染，显著降低仔猪粪便中的病毒粒子含量(P0.05)，对猪流行性腹泻病毒感染仔猪具有有效的保护作用。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明首先提供一种猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体，其具有如SEQID No.1所示的猪源抗体的重链可变区VH的氨基酸序列、如SEQ ID No.2所示的猪源抗体的轻链可变区VL的氨基酸序列和中间连接肽Linker的氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS，组成顺序为VH-Linker-VL的猪源单链抗体片段。

在本发明的一个实施方式中，猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体，记为单链抗体ZW4-36，具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。

本发明还提供一种猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体的编码基因，具有如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。

本发明还提供一种含有猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体的重组质粒。

本发明还提供一种表达猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体的重组腺病毒，其至少具有如SEQ ID No.1所示的猪源抗体的重链可变区VH的氨基酸序列、如SEQ IDNo.2所示的猪源抗体的轻链可变区VL的氨基酸序列和中间连接肽Linker的氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS，组成顺序为VH-Linker-VL的猪源单链抗体片段。

本发明还提供一种表达猪源性抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单链抗体的重组腺病毒的制备方法，包括以下步骤：

(1)在单链抗体ZW4-36的5’端添加SalI酶切位点，3’端添加HindIII酶切位点，SalI酶切位点序列为GTCGAC，HindIII酶切位点序列为AAGCTT，单链抗体ZW4-36具有如SEQID No.3所示的氨基酸序列；

(2)将单链抗体ZW4-36构建入穿梭质粒pAdTrack-CMV中，获得重组穿梭质粒pAdTrack-ZW4-36；

(3)用PmeI酶将重组穿梭质粒pAdTrack-ZW4-36进行单酶切，回收线性化的质粒片段，转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态细胞，进行同源重组；