[发明专利]基于褐菖鲉评估无对照站位石油类生物毒性效应的方法

权利要求书

1.基于褐菖鲉评估无对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)采用海区原位监测实验，设置若干个监测站位；

2)将体长、体重基本一致的健康褐菖鲉置于套有尼龙网的塑料筐中，用绳子悬挂于不同监测站位的标记物上，没入海平面至少1m；

3)监测持续14天，并在最后一天观察褐菖鲉存活情况，取存活褐菖鲉的肝、胆、性腺组织进行生理生化检测；

4)根据个体、组织指标和分子生物标志物响应情况，将海洋石油类生物毒性效应分为五级：若某一监测站位出现褐菖鲉非外伤死亡且存活褐菖鲉中出现组织或分子水平的指标响应的，评为五级；若某一监测站位出现褐菖鲉组织水平的指标响应但未有死亡的，评为四级；若某一监测站位褐菖鲉未有个体或组织水平的指标响应而仅有分子生物标志物响应的，评级区间为一至三级，基于各分子生物标志物的分级系数和值进行划分；

所述值的算法为：(1)对于每一种分子生物标志物，首先将各站位分子生物标志物平均值x_i，所有站位上的总平均值和标准差s，按式(1)进行均一化处理：式(1)中x’_i为x_i经均一化后的值；(2)对于上述5种分子生物标志物，均令Z_i＝x’_i(2)；(3)令|x_min|＝所有站位中该分子生物标志物均一化数值最小值的绝对值，每个站位该分子生物标志物的得分为B_i＝Z_i+|x_min|(3)；(4)绘制星状图并计算面积：将某站位上每种分子生物标志物的B_i值大小以星状图中的辐射线长度表示，某站位的IBR值通过计算星状图面积得到，星状图面积即图中由相邻分子生物标志物的辐射线围成的三角形面积A_i之和，即式(5)中，α为相邻两条辐射线的夹角，星状图中最后一条辐射线与第一条辐射线重合；(5)将每个站位的5种分子生物标志物在星状图上进行不重复排列，分别计算出每种排列方式下的IBR值，并将所有排列方式的IBR取平均值作为该站位的值。

2.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估无对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，所述的海区原位监测实验，应设置不少于3个有代表性的监测站位。

3.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估无对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，步骤2)所述健康的褐菖鲉为发育正常，体态良好，未处于繁殖期并在室内养殖池暂养10天的褐菖鲉。

4.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，每个站点的褐菖鲉为8-15尾。

5.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估无对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，步骤3)所述生理生化检测包括肝体比、性体比、肝7-乙氧基异吩恶唑-O-脱乙基酶活性、胆汁萘类代谢物含量、胆汁菲类代谢物含量、胆汁芘类代谢物含量、胆汁苯并[a]芘类代谢物含量。

6.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估无对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，步骤4)所述生物毒性效应分为5级具体包括：第一级，为无风险等级，意味着生物体未受到石油类的污染；第二级，为低风险等级，意味着生物体在分子水平对石油类污染的响应程度轻微；第三级，为中风险等级，意味着生物体在分子水平对石油类污染的响应程度加剧，但尚未引起生物体组织水平的响应；第四级，为高风险等级，意味着生物体在组织水平出现了对石油类污染的响应，但尚未引起生物死亡；第五级，为极高风险等级，意味着生物体在个体水平出现了对石油类污染的响应，开始死亡。

7.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估无对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，步骤4)所述一至三级的分级阈值的算法为：(1)定义各分子生物标志物的分级系数：所述5种分子生物标志物即肝7-乙氧基异吩恶唑-O-脱乙基酶活性、胆汁萘类代谢物含量、胆汁菲类代谢物含量、胆汁芘类代谢物含量、胆汁苯并[a]芘类代谢物含量)的一级分级系数均为1.2，二级分级系数均为2.0。