[发明专利]一种带有内部荧光的表面可修饰纳米颗粒及其在miRNA检测中的应用

权利要求书

1.一种带有内部荧光的表面可修饰纳米颗粒，其特征在于，该表面可修饰纳米颗粒主要由内部的CdTe量子点荧光团及其外依次包覆的二氧化硅壳层和聚多巴胺壳层三部分组成，称为CdTe@SiO₂@PDA；其中CdTe量子点荧光团集中包覆在均匀的二氧化硅壳层中间，进一步包覆均匀的聚多巴胺层，构成核-壳-壳结构；

所述的核-壳-壳结构纳米颗粒的粒径为120～180nm；

所述的核-壳结构纳米颗粒粒径为100～160nm，二氧化硅层厚度为50～80nm。

2.一种权利要求1所述的表面可修饰纳米颗粒作为非标记型比率荧光探针在miRNA检测中的应用，其特征在于，步骤如下：

(1)将表面可修饰纳米颗粒CdTe@SiO₂@PDA分散在煮沸过滤的pH为7.5的羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液中，使CdTe@SiO₂@PDA的分散浓度为0.3～0.5mg/ml，作为母液；向母液加入1mM的待测miRNA目标序列的互补链搅拌30分钟后，加入0.5～2mM MgCl₂，控制CdTe@SiO₂@PDA:miRNA:Mg²⁺的摩尔比＝1:1:0.5，搅拌过夜使互补链充分吸附于CdTe@SiO₂@PDA表面；

(2)上述混合体系经离心分离上清后，沉淀颗粒重新分散在煮沸过滤的pH为7.5的HEPES中，使沉淀颗粒分散浓度为0.3～0.5mg/ml，分别加入目标序列miRNA链和待测体系，37℃下孵育3小时；

(3)向混合体系中加入SG1染料，充分混合后分别测定混合反应体系在530nm、630nm处的荧光强度比值，以混合反应体系中的miRNA浓度为横坐标，混合反应体系的荧光强度比值I₆₃₀/I₅₃₀为纵坐标，获得miRNA浓度-荧光强度比值曲线；根据所述荧光强度比值与所对应的miRNA浓度之间的关系，建立线性回归方程；

(4)计算待测体系在530nm、630nm处的荧光强度比值，根据浓度-荧光强度比值的关系，得出待测体系中的目标链浓度。