[发明专利]一种白颌大树蛙防御肽Zs-CATH及其基因和应用

说明书

本发明属于多肽应用技术领域，具体提供了白颌大树蛙防御肽Zs‑CATH及其基因和应用，该防御肽Zs‑CATH是中国两栖类白颌大树蛙防御肽基因编码的一种环状多肽，分子量3602.47道尔顿，等电点10.49，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。编码防御肽Zs‑CATH前体的基因由628个核苷酸组成，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，其中第352–450位核苷酸为成熟白颌大树蛙防御肽Zs‑CATH的编码基因。白颌大树蛙防御肽Zs‑CATH具有广谱抗微生物性，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和粪产碱菌引起的感染疾病具有显著的抑制细菌和真菌生长的作用，可作抗菌剂和医疗器械涂布药物。

技术领域

本发明属于多肽应用技术领域，具体涉及一种白颌大树蛙防御肽Zs-CATH及其基因和应用。

背景技术

近年来的研究表明，抗菌肽是所有动物、植物和微生物防御系统中的一个重要组成部分。它们是机体为抵御病原微生物侵袭而产生的一类小分子活性多肽，具有分子量小、稳定性好、杀菌迅速和不易产生耐药性等特点。这些特性使得抗菌肽具有非常广阔的运用前景，有望替代目前临床上易于产生耐药性的传统抗生素药物。抗菌肽不易产生耐药性的原因是，其杀菌机理与传统抗生素不同。它们主要是作用于细菌的细胞膜,破坏其稳定性，进而细胞膜渗透性发生改变，使得内容物外泄导致细胞死亡。不同物种来源或同一物种中抗菌肽的结构形式和生物活性差别较大。国内外研究人员一直致力于从不同物种中发掘结构新颖的抗菌肽，直接利用或者以其为模板进行分子改造。目前，已有抗菌肽用于海产品保鲜和动物饲料添加剂中。结合生态环境从各种自然资源中发掘具有潜在药用价值的抗菌肽是目前多肽新药研究的一个热点。

两栖动物是抗菌肽资源发掘中最重要的一类资源，其皮肤裸露，为抵御环境中各种微生物的侵袭，它们能够分泌多种分子结构新颖、功能复杂多样的的抗菌肽。这些活性多肽广泛参与机体的各种生理活动，具有各种药理活性，如抗微生物、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、创伤修复、镇痛等作用。树蛙与其它的两栖动物明显不同的地方就是，它们的大部分时间都是在树上度过，而其它的两栖动物大部分时间都在水里或陆地上。这种特异的树栖生活使得它们面临的天敌以及外界微生物都与其他的两栖动物有所差异，经过适应性进化，必然拥有一套具有自身优势的先天免疫防御系统。

据国内外文献报道，已从各种生物来源分离得到不同的活性多肽，而且有些已进入临床阶段。虽然我国对两栖动物应用有着悠久的历史，但是都是整体入药，对其活性成分和药理性质的研究比较薄弱。白颌大树蛙主要分布于云南、西藏等地，是我国特色资源动物之一，但其皮肤分泌物中cathelicidin家族的抗菌肽少有报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中树蛙分泌的多肽研究薄弱的问题。

为此，本发明提供了一种白颌大树蛙防御肽Zs-CATH，该防御肽Zs-CATH是中国两栖类白颌大树蛙防御肽基因编码的一种环状多肽，分子量3602.47道尔顿，等电点10.49，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1(ASKKGKCNFMCKVKQKLRAIGSKTVIGTVVHKI)所示。

SEQ ID NO.1：

其第七位半胱氨酸和第十一位半胱氨酸组成一对分子内二硫键。

该白颌大树蛙防御肽前体的编码基因由628个核苷酸(SEQ ID NO:2)组成，其自5’端至3’端序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：

其中，第352–450位核苷酸为成熟白颌大树蛙防御肽Zs-CATH的编码基因。

本发明提供的这种白颌大树蛙防御肽Zs-CATH可用于制备广谱抗微生物(包括革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌)试剂，还对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和粪产碱菌引起的感染疾病具有显著的治疗的作用。