[发明专利]一种毛囊干细胞外泌体的分离方法及应用

说明书

本发明提出一种毛囊干细胞外泌体的分离方法及应用，涉及生物医学技术领域。该方法以聚乳酸和聚乙烯醇作为聚合原料进行聚合制得多孔微球，将其填充在尺寸排阻柱中，不仅能够有效降低外泌体的黏附作用，避免堵塞的情况的产生，还可有效缩短分离时间，提升分离效率；通过海藻酸钠使得微球内部及表面形成致密且均匀的多孔结构，能够有效提升分离效果，从而提升外泌体的纯度和浓度，达到预期效果；多孔微球的制备方法简单便捷，易达到批量化工业生产的效果，实现经济利益最大化。由毛囊干细胞分离获得的外泌体试用具有较好的防治脱发效果。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体而言，涉及一种毛囊干细胞外泌体的分离方法及应用。

背景技术

外泌体是由细胞分泌的一类细胞外囊泡，其粒径约30nm-200nm，通常携带蛋白质、mRNA、miRNA和脂质等生物活性分子，可将这些生物活性分子融入靶细胞而实现细胞交互，因此，在细胞信号传递中起重要作用。由于外泌体具有上述特性，现已被应用于多个领域。

通常，外泌体的分离方式主要包括超速离心法、聚合物沉淀法、尺寸排阻法、免疫亲和法、膜亲和方法等。其中尺寸排阻法主要有超滤和尺寸排阻柱两种。超滤是最常见的利用尺寸排阻原理提取外泌体的方法，相比于超速离心，超滤耗时短且不需要特别的仪器设备。超滤提取样本中的外泌体依据的原理是将小于滤膜孔径的杂质颗粒与外泌体分离。已有文献利用超滤结合短时间的离心快速富集了尿液中的外泌体，该方法提取外泌体的效率和超离相当。

尺寸排阻法是尺寸排阻柱里面填充着一定分子孔径的多孔凝胶，当样本进入凝胶柱时，大粒径的颗粒率先流出，小于凝胶孔径的颗粒由于受到排阻随后流出，因此达到不同粒径颗粒的分离效果。但是该方法容易受到与外泌体同等大小的杂质的干扰，从而使得分离而得外泌体纯度较低，分离效果较差。

基于此，提出一种提升外泌体分离纯度的方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种毛囊干细胞外泌体的分离方法，其能够将分离纯化由毛囊干细胞获得的外泌体，有效提升其纯度，使用价值更高。

本发明的另一目的在于提供一种毛囊干细胞外泌体的应用，其可激发毛囊活性，促进生发，达到防治脱发的效果。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

一方面，本发明提出一种毛囊干细胞外泌体的分离方法，主要包括以下步骤：

收集P5-P6毛囊干细胞的培养液，制得待分离品；再将待分离品与流动相混合，经过尺寸排阻柱进行分离，制得外泌体；尺寸排阻柱中填充有多孔微球，且多孔微球的制备方法如下：

将溶解后的聚乳酸与1w/v％-3w/v％的聚乙烯醇混合，经24h-36h的搅拌后，制得混合液一；再将混合液一与海藻酸钠混合，5h-7h后，制得混合液二；将混合液二滴入氯化钙溶液中，制得微球；将微球在碱液中浸泡20min-30min，制得多孔微球。

另一方面，本发明提出一种毛囊干细胞外泌体的应用，将上述分离方法分离而得的外泌体应用于防治脱发。

本发明实施例的毛囊细胞外泌体的分离方法及应用至少具有以下有益效果：

一、以聚乳酸和聚乙烯醇作为聚合原料进行聚合制得多孔微球，将其填充在尺寸排阻柱中，不仅能够有效降低外泌体的黏附作用，避免堵塞的情况的产生，还可有效缩短分离时间，提升分离效率；

二、通过海藻酸钠使得微球内部及表面形成致密且均匀的多孔结构，能够有效提升分离效果，从而提升外泌体的纯度和浓度，达到预期效果；

三、多孔微球的制备方法简单便捷，易达到批量化工业生产的效果，实现经济利益最大化。

四、由毛囊干细胞分离获得的外泌体试用具有较好的防治脱发效果。

具体实施方式